萍鄉(xiāng)紅鯽轉(zhuǎn)鐵蛋白研究.pdf

1、萍鄉(xiāng)紅鯽(Pingxiangred-transparentcruciancarp，Carassiusauratusvat.Ping-xiangncsis)是江西省萍鄉(xiāng)的一種野生鯽魚(yú)突變種。經(jīng)過(guò)七年的工作，已經(jīng)完成了對(duì)其6代的選育。選育后的萍鄉(xiāng)紅鯽具有生長(zhǎng)速度快、適應(yīng)性強(qiáng)、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、易養(yǎng)易繁、抗病力強(qiáng)等優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀，2008年被全國(guó)水產(chǎn)原、良種審定委員會(huì)審定為新品種。實(shí)驗(yàn)以萍鄉(xiāng)紅鯽的血清轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)為對(duì)象，通過(guò)電泳研究該魚(yú)TF的表型

2、、分子量等遺傳性質(zhì)；通過(guò)同源克隆得到該魚(yú)TF-cDNA的序列，以期了解其遺傳背景，為進(jìn)一步的科學(xué)研究提供資料。 本文的工作主要為： 一、對(duì)萍鄉(xiāng)紅鯽的血清轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin，簡(jiǎn)稱TF)進(jìn)行電泳分析。聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)發(fā)現(xiàn)隨機(jī)選取的12尾萍鄉(xiāng)紅鯽TF表型完全的相同，個(gè)體間沒(méi)有差異；萍鄉(xiāng)紅鯽的TF表型為兩個(gè)條帶，推測(cè)可能由一個(gè)座位上的二個(gè)等位基因遺傳決定。采用十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-

3、PAGE)對(duì)TF進(jìn)行分析得出其分子量大約為71KDa。經(jīng)人工選育的萍鄉(xiāng)紅鯽TF表型一致，種群內(nèi)未見(jiàn)多樣性，認(rèn)為其遺傳性狀趨于穩(wěn)定純系：萍鄉(xiāng)紅鯽不同個(gè)體間完全一致的TF表型及分子量，可以利用TF雌核發(fā)育鑒定的遺傳標(biāo)記揭示萍鄉(xiāng)紅鯽具有雌核發(fā)育的生殖方式。 二、為進(jìn)一步了解了萍鄉(xiāng)紅鯽TF的分子機(jī)制，利用RT-PCR和RACE-PCR克隆出萍鄉(xiāng)紅鯽TF互補(bǔ)基因，克隆得到的TF-cDNA包含完整的開(kāi)放閱讀框(openreadingfram

4、e,ORF)，肉紅鯽TF-cDNA長(zhǎng)2364堿基對(duì)(basepair,bp)，包括8bp的5’非編碼區(qū)(untranslatedregion，UTR)，355bp的3'UTR，編碼666個(gè)氨基酸，理論信號(hào)肽切割位點(diǎn)位于15-16個(gè)氨基酸之間，預(yù)測(cè)的分子量為71.9，沒(méi)有潛在的糖基化位點(diǎn)，還有34個(gè)半胱氨酸殘基。結(jié)果分析表明萍鄉(xiāng)紅鯽TF遺傳性質(zhì)與彩鯽A、銀鯽E同源性較高。 最后對(duì)萍鄉(xiāng)紅鯽TF蛋白序列進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)理論分析和三級(jí)結(jié)構(gòu)的