自噬影響肌聯(lián)蛋白表達在糖尿病心肌病中的作用研究.pdf

1、目的：自噬在細胞內會形成具有典型雙層膜結構的的囊泡（自噬體），自噬體內包含有待降解的蛋白質和（或）受損的細胞器，含有這些待降解物質的自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體，自噬溶酶體內的蛋白酶將其內含物消化成氨基酸等能量物質供細胞維持其穩(wěn)態(tài)。在糖尿病病理生理狀態(tài)下，心肌細胞自噬水平會顯著增加。心肌細胞內過度激活的自噬有可能影響心肌肌纖維及線粒體的功能，從而引起心臟舒張功能的改變。抑制過度激活的自噬可能通過影響心肌肌聯(lián)蛋白的功能從而對糖尿病引起

2、的射血分數保留型心力衰竭起到治療作用。
　　方法：①采用STZ誘導的I型糖尿病小鼠模型。利用心臟彩色超聲心動圖技術觀察糖尿病小鼠心臟功能。②采用STZ誘導的I型糖尿病小鼠模型，觀察腹腔注射自噬抑制劑氯喹、3-MA和自噬激動劑雷帕霉素14天小鼠血糖、體重；末次給藥后，彩色超聲多普勒觀察各組小鼠心臟功能；Western Blot分析小鼠自噬相關蛋白LC3、p62的表達；透射電鏡觀察各組小鼠自噬體及自噬溶酶體數量；瓊脂糖凝膠電泳后銀染法

3、觀察小鼠心肌肌聯(lián)蛋白N2BA和N2B兩種亞型比值。
　　結果：① STZ誘導的糖尿病小鼠在成模后第7周開始出現心臟舒張功能障礙，小鼠心臟EF（Ejection Fraction;射血分數）、FS（Fractional shortening；短軸縮短率）等收縮功能指標無明顯變化，舒張功能指標E/A峰倒置，MVDT（E-wave decelaration time）延長。②糖尿病小鼠給予自噬調節(jié)劑14天，糖尿病模型組及給藥組相較于正常

4、對照組血糖顯著上升（P<0.01），糖尿病各組均出現了體重較正常對照組明顯減輕（P<0.01），雷帕霉素組小鼠體重較糖尿病對照組進一步降低（P<0.01）。除雷帕霉素組出現心率較糖尿病對照組明顯降低（P<0.01）外，其余各組均無明顯變化。③糖尿病小鼠各組心臟體重均較正常對照組明顯降低（P<0.01）。雷帕霉素組小鼠較糖尿病對照組心臟體重明顯降低（P<0.01），心臟重量指數各組除雷帕霉素組外其余組均較正常對照組明顯降低（P<0.05）

5、，左心室重量指數糖尿病對照組和雷帕霉素組較正常組明顯降低外（P<0.05），其余組均無明顯變化（P>0.05）。④腹腔注射自噬抑制劑氯喹后，糖尿病收縮功能指標EF和FS相對于正常對照組和糖尿病對照組無顯著差異（P>0.05），糖尿病小鼠舒張功能指標 E/A峰與糖尿病對照組相比顯著增加（P<0.01）、MVDT與糖尿病對照組相比顯著降低（P<0.05）。心肌肌聯(lián)蛋白N2BA/N2B比值與糖尿病對照組相比顯著降低（P<0.01）。自噬相關蛋

6、白LC3-II/LC3-I比值較糖尿病對照組顯著降低（P<0.05），p62蛋白的表達較糖尿病對照組顯著增加（P<0.01），透射電鏡觀察自噬體和自噬溶酶體數量較糖尿病對照組顯著減少。腹腔注射自噬抑制劑3-MA后，糖尿病收縮功能指標EF和FS相對于正常對照組和糖尿病對照組無顯著差異（P>0.05），糖尿病小鼠舒張功能指標E/A峰與糖尿病對照組相比無顯著變化（P>0.05），與正常對照組相比顯著降低（P<0.05）、MVDT與糖尿病對照組

7、及正常對照組相比無顯著變化（P>0.05）。心肌肌聯(lián)蛋白N2BA/N2B比值與糖尿病對照組相比無顯著變化（P>0.05），相對于正常對照組顯著增加（P<0.01）。自噬相關蛋白LC3-II/LC3-I比值較糖尿病對照組顯著降低（P<0.05），p62蛋白的表達較糖尿病對照組顯著增加（P<0.01），透射電鏡觀察自噬體和自噬溶酶體數量較糖尿病對照組減少。腹腔注射自噬增強劑雷帕霉素后，糖尿病收縮功能指標EF和FS相對于正常對照組和糖尿病對照

8、組無顯著差異（P>0.05），小鼠舒張功能E/A峰與糖尿病對照組相比顯著降低（P<0.05），與正常對照組相比顯著降低（P<0.01），MVDT與正常對照組相比顯著增加（P<0.01）。心肌肌聯(lián)蛋白N2BA/N2B比值與正常對照組相比顯著增加（P<0.01）。自噬相關蛋白LC3-II/LC3-I比值較正常對照組顯著增加（P<0.01），p62蛋白的表達較正常對照組明顯增加（P<0.05），透射電鏡觀察自噬體和自噬溶酶體數量較正常對照組和