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文檔簡介
1、目的:探討凋亡和自噬水平在糖尿病大鼠椎間盤髓核組織中的變化及其作用。
方法:2月齡SD大鼠40只，分為糖尿病組和正常組，糖尿病組通過注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)復(fù)制糖尿病模型，正常組注射相同劑量檸檬酸鈉/檸檬酸緩沖液。16 w后，完整獲取大鼠腰椎間盤，一部分椎間盤經(jīng)石蠟包埋切片，蘇木素-伊紅(HE)染色、阿里新藍(lán)染色，在組織水平檢測椎間盤病理變化。剩余部分椎間盤經(jīng)液氮速凍，保存于-80℃冰箱，用于后續(xù)
2、提取髓核組織進(jìn)行Western blot檢測。DNA原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測髓核細(xì)胞凋亡率，免疫組織化學(xué)及Western blot方法檢測髓核組織凋亡和自噬水平。
結(jié)果:HE和阿里新藍(lán)染色顯示糖尿病大鼠椎間盤發(fā)生退變。和正常組相比，caspase3陽性細(xì)胞比例在糖尿病大鼠椎間盤中明顯增加。TUNEL結(jié)果顯示糖尿病大鼠椎間盤髓核細(xì)胞凋亡率升高;Western blot、免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)自噬指標(biāo)LC3Ⅱ/LCⅠ比例和b
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