氟維司群對乳腺癌細胞EMT表型的影響及其信號機制研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討氟維司群（ICI182780，ICI）對乳腺癌細胞上皮-間質轉化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）表型的影響及其信號機制，為探尋治療乳腺癌的高效方法提供實驗依據(jù)。
　　方法:以雌激素受體（Estrogen receptor，ER）陽性、G蛋白偶聯(lián)雌激素受體（G protein-coupled estrogen receptor，GPER）陽性乳腺癌細胞 MCF-7和

2、ER陰性、GPER陽性乳腺癌細胞MDA-MB-468為研究模型；常規(guī)細胞培養(yǎng)，以 ICI（E2作為對照）刺激處理模型細胞，需要時用GPER抑制劑G15預處理細胞；采用劃痕修復和侵襲小室實驗分別考察細胞遷移和侵襲能力；通過蛋白印跡法檢測細胞蛋白表達水平；Sh-RNA-CANP2轉染細胞以沉默其基因的表達，嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達細胞株。
　　結果：（1）ICI（10μM）或E2（50nM）刺激模型細胞，可明顯增強MCF-7細胞遷移率（P

3、＜0.05 vs DMSO）和侵襲率（P＜0.01 vs DMSO）；MDA-MB-468細胞遷移率和侵襲率也明顯升高（P＜0.01 vs DMSO）。（2）ICI或E2處理模型細胞，MCF-7細胞纖連蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）表達明顯上調（P<0.05，P<0.01 vs DMSO），E-鈣黏素（E-cadherin，E-Cad）表達下調（P<0.01，P<0.05 vs DMSO）；MDA-MB-468細胞 FN表達也明顯

4、上調，E-Cad表達下調（P<0.05 vs DMSO）。（3）給予G15（10μM）預處理模型細胞后，MCF-7細胞ICI或E2處理組遷移率均下降（P＜0.05，P＜0.01 vs ICI），侵襲率降低（P＜0.01，P＜0.05 vs ICI）；MDA-MB-468細胞遷移率降低（P＜0.05，P＜0.01 vs ICI），侵襲率也降低（P＜0.05 vs ICI）。（4）G15還可明顯抑制ICI或E2誘導的模型細胞FN的上調（P<

5、0.01 vs ICI或E2），MDA-MB-468細胞E-cad的下調(P＜0.05 vs ICI或E2），但對MCF-7細胞E-cad表達無明顯影響(P＞0.05 vs ICI或E2）。（5）Sh-RNA轉染沉默模型細胞CANP2表達可明顯降低細胞遷移和侵襲能力（P＜0.05 vs NCSH）。（6）CANP2沉默可下調模型細胞FN表達（P＜0.01）（P＜0.05 vs NCSH），上調細胞E-cad的表達（P＜0.01 vs N

6、CSH）。（7）Sh-RNA轉染沉默模型細胞CANP2表達，E2或 ICI誘導的MCF-7細胞遷移率和侵襲率均下降（P＜0.05 vs NCSH）；MDA-MB-468細胞兩處理組遷移率下降（P＜0.05 vs NCSH），侵襲率降低（P＜0.01 vs NCSH）。（8）CANP2表達沉默，E2或ICI誘導的模型細胞FN的上調及E-cad表達的下調被明顯抑制（P＜0.05 vs NCSH）。
　　結論：ICI能誘導乳腺癌細胞從E