樹鼩Toll-LikeReceptor1基因的克隆及序列分析.pdf

1、目的：對樹鼩Toll樣受體1(Toll like receptor1，TLR1)基因進行克隆和測序，對其序列進行分析以了解其蛋白結構及相關功能。為今后應用樹鼩作為病毒感染動物模型開展病毒識別機制和防治策略研究提供理論基礎。
　　方法：在GenBank中查找人類、黑猩猩、獼猴、小鼠、褐家鼠、成都麻羊、野馬、野豬、中國荷斯坦牛、家犬共十種物種的TLR1的mRNA基因序列，在其高度保守區(qū)設計樹鼩TLR1基因的簡并引物；運用RT-PCR方

2、法從樹鼩外周血總RNA中體外擴增樹鼩TLR1的cDNA基因序列；將擴增的目的基因片段純化回收與T載體連接；轉化感受態(tài)細菌，篩選陽性克隆子并用菌落PCR驗證；轉化成功后進行測序，將測序結果用NCBI的BLAST工具進行檢索比對序列，確認其為樹鼩TLR1基因序列；并用生物信息學軟件對序列結構進行分析預測。
　　結果：1.在體外成功擴增出樹鼩TLR1的cDNA片段，回收獲得其目的基因片段；2.成功篩選出陽性克隆子并進行DNA測序，獲得樹

3、鼩TLR1的cDNA部分基因序列，序列長度為1110bp。
　　結論：運用生物信息學軟件對樹鼩TLR1基因序列進行分析，預測該基因序列編碼370個氨基酸，包括了TLR1序列跨膜區(qū)、C端富含亮氨酸重復基序(LRR)結構域和部分胞外區(qū)，分子量為42.33kDa，等電點為8.24。含有11個絲氨酸(Ser)、3個蘇氨酸(Thr)和6個酪氨酸(Tyr)位點可能成為蛋白質的磷酸化位點。氨基酸序列比對分析表明，樹鼩TLR1基因序列與人類的TL