FOXO1基因參與調(diào)控人肝癌細胞胰島素抵抗的研究.pdf

1、I?分類號：分類號：密級：密級：研究生學(xué)位論文研究生學(xué)位論文論文題目（中文）論文題目（中文）FOXO1基因參與調(diào)控基因參與調(diào)控人肝癌細胞胰島素抵抗肝癌細胞胰島素抵抗的研究的研究論文題目（外文）論文題目（外文）TheresearchofinsulinresistancefFOXO1geneinvolvedinregulationofhumanlivercancercell研究生姓名研究生姓名連立強連立強學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)口腔醫(yī)學(xué)口腔醫(yī)學(xué)

2、口腔臨床醫(yī)學(xué)口腔臨床醫(yī)學(xué)研究方向研究方向口腔頜面外科學(xué)口腔頜面外科學(xué)學(xué)位級別學(xué)位級別碩士碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱謝富強謝富強教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月2015年07月至月至2016年05月論文提交日期論文提交日期2016年04月論文答辯日期論文答辯日期2016年05月學(xué)位授予日期學(xué)位授予日期III?FOXO1FOXO1基因參與調(diào)控基因參與調(diào)控人肝癌細胞胰島素抵抗的研究肝癌細胞胰島素抵抗的研究中文中文摘要摘要目的：目

3、的：本實驗選用人源肝癌細胞HepG2細胞株，通過高濃度胰島素誘導(dǎo)HepG2細胞建立HepG2胰島素抵抗模型，分析不同濃度胰島素條件下HepG2肝細胞對糖原消耗量，確定胰島素誘導(dǎo)的最佳誘導(dǎo)濃度和時間，檢測在不同濃度和時間的胰島素干預(yù)下，HepG2肝細胞中FOXO1基因的表達差異以及FOXO1蛋白的表達差異，進而得出研究FOXO1基因是否參與調(diào)控肝癌細胞胰島素抵抗。并且利用胰島素增敏藥物吡格列酮降低HepG2細胞胰島素抵抗程度，再次檢測He

4、pG2肝細胞中FOXO1基因的表達差異以及FOXO1蛋白的表達差異，反面驗證FOXO1基因是否直接調(diào)控參與調(diào)控肝癌細胞胰島素抵抗。方法：方法：培養(yǎng)人肝癌細胞(HepG2)當(dāng)細胞生長超過培養(yǎng)瓶底面85%以上面積，進行傳代，以密度為1105ml分為6組，將細胞均勻的種植于96孔板中，待細胞貼壁后，去除培養(yǎng)液中血清成分進行培養(yǎng)即為同步化24小時后，對每組細胞使用不同濃度胰島素進行干預(yù)，胰島素濃度分別為1105，1106，1107，1108，1

5、109，11010（單位molL)。干預(yù)24小時后，使用葡萄糖氧化酶過氧化物酶法檢測各組細胞培養(yǎng)中葡萄糖含量，用MTT檢測每孔細胞含量，標(biāo)化細胞糖原消耗量，分析最佳濃度。重新將細胞以密度為1105ml分為3組，接種于96孔板，待細胞貼壁后，進行無血清培養(yǎng)即為同步化24小時后，對每組細胞使用最佳濃度胰島素進行干預(yù)，對每組細胞分別采用不同時間進行誘導(dǎo)，分別為24h36h48h使用葡萄糖氧化酶過氧化物酶法檢測各組細胞中葡萄糖含量，MTT檢測每

6、孔細胞含量，標(biāo)化細胞糖原消耗量。分析最佳時間。確定最佳時間，收集細胞，使用RTPCR技術(shù)檢測不同胰島素干預(yù)組FOXO1基因表達，Western印跡法(WB)定量檢測各組細胞FOXO1蛋白表達水平，驗證FOXO1與胰島素抵抗的相關(guān)性。用MTT法檢測吡格列酮對細胞凋亡的影響，選取影響較低的濃度，對最佳濃度，最佳時間的胰島素干預(yù)組，分別用不含吡格列酮的培養(yǎng)液和含不同濃度的吡格列酮培養(yǎng)液培養(yǎng)24h，使用葡萄糖氧化酶過氧化物酶法檢測各組細胞中葡萄