大鼠飲酒后腦基底動(dòng)脈組織結(jié)構(gòu)改變及MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)情況.pdf

1、目的:隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及國民生活水平的不斷提高,各種酒類開始大量涌現(xiàn)。嗜酒、酗酒、酒依賴逐漸形成普遍性,隨之滋生的社會(huì)問題日益嚴(yán)重。大量研究表明長(zhǎng)期大量飲酒可通過調(diào)節(jié)腦血流、腦血管舒縮功能,影響血壓及血管通透性,改變血液粘稠度及凝血功能等多種途徑促進(jìn)腦血管意外的發(fā)生,但其具體機(jī)制尚未明了,成為法醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)及基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的研究焦點(diǎn)。在法醫(yī)學(xué)檢案中,飲酒后輕度外力作用導(dǎo)致蛛網(wǎng)膜下腔出血的案件較為常見,飲酒的參與度問題成為此類案例鑒定的難點(diǎn)。<

2、br>　　 本實(shí)驗(yàn)擬以整體動(dòng)物模型為研究對(duì)象,應(yīng)用HE染色、特殊染色、透射電子顯微鏡(TEM)技術(shù)與免疫組織化學(xué)方法,深入觀察急慢性飲酒大鼠腦基底動(dòng)脈的組織結(jié)構(gòu)改變,并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行探討,進(jìn)一步閘明飲酒對(duì)腦血管的影響及作用機(jī)制,為飲酒后輕度外力作用導(dǎo)致蛛網(wǎng)膜下腔出血案件的飲酒參與度鑒定提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重220g±10g,隨機(jī)分成對(duì)照組、急性組、慢性低劑量組、慢性

3、中劑量組、慢性高劑量組。用市售白酒紅星二鍋頭(56％v/v)制備模型,采用大鼠灌胃器進(jìn)行灌胃,每天2次,間隔10小時(shí)。實(shí)驗(yàn)前給予適應(yīng)性蒸餾水灌胃1周。急性組給酒量為56％v/v1.2mL/100g/次,分別于實(shí)驗(yàn)1天、1周、2周、3周末次灌胃24小時(shí)后處死大鼠;慢性各組自實(shí)驗(yàn)開始至第3周給酒量、給酒濃度逐漸遞增,至第4周達(dá)到足量(慢性低劑量組:56％v/v0.4 mL/100g/次;慢性中劑量組:56％v/v0.8 mL/100g/次:

4、慢性高劑量組:56％v/v1.2 mL/100g/次),維持至第12周末。實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠行為學(xué)改變,測(cè)量并記錄大鼠體重和收縮壓,并分別于第4周、8周、12周末次灌胃24小時(shí)后處死大鼠。對(duì)照組用蒸餾水代替白酒進(jìn)行灌胃。取腦后全腦固定制作石蠟切片,進(jìn)行Weigert彈力纖維染色觀察大鼠腦基底動(dòng)脈內(nèi)彈力膜改變;在體視顯微鏡下剝離大鼠腦基底動(dòng)脈,觀察基底動(dòng)脈超微結(jié)構(gòu)改變;進(jìn)一步應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠腦血管基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)

5、、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表達(dá)變化。
　　 數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示,用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA),用最小顯著差法(LSD)作兩兩比較,以P＜0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果:
　　 1行為學(xué)改變及體重變化:單次給酒數(shù)分鐘后大鼠即出現(xiàn)不同程度的酒后表現(xiàn),包括:興奮性增加,平衡不穩(wěn),反應(yīng)遲鈍,嗜睡甚至癱軟等。隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間

6、的延長(zhǎng),各慢性飲酒組大鼠進(jìn)食量減少,倦怠少動(dòng),反應(yīng)性差,體重增長(zhǎng)緩慢,實(shí)驗(yàn)后期甚至不增反降,慢性中劑量組、高劑量組大鼠體重在實(shí)驗(yàn)第4周末與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05);慢性低劑量組大鼠體重在實(shí)驗(yàn)第12周末與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 2收縮壓變化:對(duì)照組大鼠收縮壓波動(dòng)平穩(wěn),各慢性組大鼠收縮壓隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì),慢性高劑量組大鼠收縮壓到實(shí)驗(yàn)第10周末與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05);慢

7、性低劑量、中劑量組到第12周末與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3組織病理學(xué)改變:
　　 3.1肝臟病理學(xué)改變:急性組肝臟主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞水腫;慢性低劑量組第4周末可見肝細(xì)胞水腫,隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)肝細(xì)胞水腫彌漫,且出現(xiàn)脂肪變性;慢性中劑量組較早可見肝細(xì)胞水腫伴部分肝細(xì)胞輕度脂肪變性,后期出現(xiàn)肝細(xì)胞嗜酸性變,炎細(xì)胞聚集;慢性高劑量組病變程度較低、中劑量組嚴(yán)重,第8周末可見彌漫性脂肪變性,進(jìn)而又出現(xiàn)多發(fā)片狀壞死

8、。
　　 3.2中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理學(xué)改變:急性組可見大腦皮層神經(jīng)元水腫,毛細(xì)血管周圍間隙擴(kuò)大;慢性組大鼠在實(shí)驗(yàn)過程中大腦皮層神經(jīng)元水腫,排列紊亂,神經(jīng)元細(xì)胞、小腦蒲肯野細(xì)胞核固縮濃染,可見嗜神經(jīng)元現(xiàn)象和毛細(xì)血管周圍間隙擴(kuò)大等現(xiàn)象。
　　 3.3腦基底動(dòng)脈內(nèi)彈力膜形態(tài)改變:急性組內(nèi)彈力膜(IEL)未見明顯改變,慢性各組內(nèi)彈力膜出現(xiàn)質(zhì)地松散、局部紊亂,甚至分層、斷裂。
　　 3.4腦基底動(dòng)脈超微結(jié)構(gòu)改變:實(shí)驗(yàn)第4周末慢

9、性高劑量組出現(xiàn)內(nèi)彈力膜質(zhì)地不均,薄厚不一;第8周末慢性各組普遍可見內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,表面微絨毛減少,內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)及內(nèi)皮細(xì)胞與內(nèi)彈力膜之間出現(xiàn)空泡,內(nèi)彈力膜質(zhì)地不均,厚薄不一,甚至出現(xiàn)分叉、分層、斷裂。
　　 4 MMP-2、MMP-9免疫組織化學(xué)結(jié)果:對(duì)照組腦實(shí)質(zhì)毛細(xì)血管、小血管和基底動(dòng)脈血管壁在各觀察點(diǎn)均無明顯MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá);急性組1周、2周末腦實(shí)質(zhì)內(nèi)毛細(xì)血管、小血管血管壁可見MMP-9陽性表達(dá);而各時(shí)間點(diǎn)腦實(shí)

10、質(zhì)內(nèi)毛細(xì)血管、小血管血管壁均未出現(xiàn)MMP-2陽性表達(dá);急、慢性各組大鼠腦基底動(dòng)脈動(dòng)脈壁未見明顯MMP-2,MMP-9陽性表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1本實(shí)驗(yàn)中慢性中劑量組大鼠飲酒8周后(第1周:56％V/V白酒用蒸餾水1:1稀釋,大鼠單次飲酒0.4mL/100g;第2周:56％V/V白酒用蒸餾水2:1稀釋,大鼠單次飲酒0.6mL/100g;第3周:56％V/V白酒,大鼠單次飲酒0.6mL/100g;第4～8周,56％V/