Acidiphilium DX1-1細胞壁相關蛋白質組學研究.pdf

1、嗜酸桿菌屬是一種嗜酸化能異樣菌，該屬菌能夠進行鐵呼吸，利用有機物或者H2還原Fe3+而獲得能量進行生長。常常與嗜酸氧化亞鐵硫桿菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）共同生活在一起，在浸礦過程中，具有重要的作用。本文通過構建嗜酸氧化亞鐵硫桿菌細胞壁相關蛋白表達圖譜，從蛋白質組學角度探討浸礦微生物表面結構，為微生物與礦物表面的吸附機理研究提供一些依據。 本論文研究中，通過投射電鏡發(fā)現，細菌體內堆積大量的透

2、明顆粒，經鑒定為聚-β-羥基丁酸酯（PHB）。本研究發(fā)現，在兩種不同的培養(yǎng)基中（硫酸鐵的有無），細菌聚集這種顆粒的能力具有很大的差異。詳細研究了不同培養(yǎng)條件下，菌體PHB的含量、細胞干重（CDW）、溶液中剩余葡萄糖的含量的變化，發(fā)現在不含有硫酸鐵的培養(yǎng)基中，PHB的含量可達40.9％CDW，而在含有硫酸鐵的培養(yǎng)基中，PHB的含量僅為14.2％CDW。 本文通過提取了嗜酸桿菌細胞壁相關蛋白，采用液相色譜-串聯質譜技術先對酶解后的蛋

3、白進行分離，分離后的肽片段直接進入質譜儀離子源進行一級和二級質譜的分析。將得到286個肽質量指紋圖譜用Mascot軟件進行數據庫搜尋得到蛋白相關信息，然后對每一個蛋白的輸出信號及亞細胞定位進行預測。這些已鑒定的蛋白中51.4％有Sec-type信號肽，16.8％具有雙精氨酸轉運信號肽（Tat），27.3％的蛋白具有脂蛋白信號肽（Lipo），18.2％的蛋白為非經典分泌蛋白（non-classically secreted protein

4、s），根據亞細胞定位預測還有32.5％的蛋白也被認為是目標蛋白。按其功能分類，38.14％的細胞壁相關蛋白質為細胞包被， 11.51％的蛋白為轉運與結合蛋白，12.61％的蛋白為假設蛋白，4.9％的蛋白為保守的假設蛋白，還有5.61％蛋白為功能未知蛋白，其他功能的蛋白含量都很少；這些蛋白質的分子量主要分布在4000～160000Da，pH值主要分布在4～12之間，其中32.52％的蛋白質的pH小于7，67.48％的蛋白質pH大于7，2