結腸癌黏膜及其細胞質膜蛋白質組學分析.pdf

1、答辯委員會主席：崔太搓教援答辯委員會成員：廑坐堡數援鮭適進教援溫州醫(yī)科大學碩士學位論文結腸癌黏膜及其細胞質膜的蛋白質組學研究摘要目的：通過蛋白質組學方法比較不同時期結腸黏膜組織的差異表達蛋白質，以期篩選出與結腸癌發(fā)生發(fā)展過程相關的蛋白質，為結腸癌的診斷和防治提供新的靶標。方法：l、小鼠結腸癌模型建立與驗證：利用氧化偶氮甲烷(Azoxymethane，AOM)和葡聚糖硫酸鈉鹽(Dextransodiumsulfate，DSS)構建炎癥相關

2、結腸癌小鼠模型，同時設SPF級健康對照組。在造模期間，觀察小鼠是否出現(xiàn)腹瀉、便血及體重改變等癥狀，并定期對實驗組小鼠結腸組織進行病理檢測以觀察結腸組織病理變化情況。分別于造模第7、12、14周進行結腸組織取材，肉眼觀察結腸大體形態(tài)改變，鏡下觀察病理組織學改變。2、基于2DELCMS／MS的方法分析結腸黏膜蛋白質組：從1)中小鼠模型剝離炎癥期(第七周)和非典型期(第十二周)的結腸黏膜組織，且鏡下檢查黏膜的純度。提取黏膜組織蛋白質進行雙向凝

3、膠電泳(Twodimensionalgelelectrophoresis，2DE)分離及考馬斯亮藍染色2DE膠。ImageScanner掃描儀掃描2DE膠獲取圖像，并應用ImageMaster2Dsoftware分析圖像中蛋白質點。尋找出的有意義差異蛋白質點，經酶解成肽段后采用液相色譜串聯(lián)質譜(LCMS／MS)分離并鑒定。鑒定出的差異表達蛋白質運用GO數據庫進行差異蛋白質功能分析及STRING軟件進行蛋白質蛋白質相互作用分析。綜合生物信

4、息學分析結果及文獻調研，篩選出其中8個差異蛋白質進行實時熒光定量PCR分析，然后選取在蛋白質和mRNA水平上表達一致的3個蛋白質進行免疫印跡(WestemBlot，WB)分析。3、基于iTRAQ標記的定量蛋白質組學方法分析結腸黏膜細胞質膜蛋白質組：從1)中小鼠模型分離腫瘤期(第十四周)結腸黏膜及腫瘤組織，純化組織質膜蛋白質，并檢測質膜蛋白質純度。質膜蛋白質經胰酶消化后，應用相對和絕對定量同位素標記(isobarictagsforrela