吲哚美辛對結(jié)腸癌細胞成瘤裸鼠作用的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景: 結(jié)腸癌是常見的消化道腫瘤，確診時多屬中晚期，手術(shù)效果較差，尋找有效防治結(jié)腸癌的藥物一直是人們關(guān)注的熱點。隨著對慢性炎癥與腫瘤發(fā)生發(fā)展之間關(guān)系研究的深入，非甾體類抗炎藥(NSAIDs)抗結(jié)腸癌的作用備受重視。大量資料顯示長期服用NSAIDs可降低結(jié)腸癌的發(fā)病率，多種NSAIDs可通過抑制細胞增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡等產(chǎn)生抗腫瘤作用，吲哚美辛(IN)也是研究較多的此類藥物之一，但具體的分子生物學(xué)機制未完全明確。NSAIDs的抗

2、炎活性主要通過環(huán)氧合酶2(COX-2)實現(xiàn)，COX-2在結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸腺癌中表達增高，COX-2抑制劑可抑制腫瘤增長，因此環(huán)氧合酶2被認(rèn)為在此過程中起關(guān)鍵作用。但COX-2并不能解釋NSAIDs抗腫瘤的全部，因為NSAIDs對不表達CQx的癌細胞同樣可產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)，不具有環(huán)氧合酶抑制活性的BSAIDs衍生物也有抗腫瘤作用，提示除環(huán)氧合酶外，NSAIDs還有其他作用靶點存在。現(xiàn)有研究表明NSAIDs可通過PPARγ、PPARδ和RKS2

3、等非COX依賴性途徑發(fā)揮抗腫瘤作用。由于大腸癌的發(fā)生是一多因素多步驟的過程，涉及多個基因的突變，而NSAIDs抗結(jié)腸癌的作用涉及到大腸癌發(fā)生發(fā)展的多個環(huán)節(jié)，具體作用機制較為復(fù)雜，故常規(guī)方法很難做到全面的研究。蛋白質(zhì)組學(xué)是動態(tài)研究一個細胞、組織或有機體中所表達全部蛋白質(zhì)的新興學(xué)科，利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究的高通量特點，有望發(fā)現(xiàn)藥物具體作用機制的線索及新的藥物靶標(biāo)。先前的研究己發(fā)現(xiàn)吲哚美辛可明顯抑制結(jié)腸癌細胞成瘤裸鼠瘤組織的生長，為此利用不表達C

4、OX-2的HCT116結(jié)腸癌細胞接種至裸鼠皮下，以成瘤裸鼠作研究對象，用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對吲哚美辛抗結(jié)腸癌的分子機制進行深入研究。 第一部分：吲哚美辛對結(jié)腸癌細胞裸鼠成瘤組織作用的功能蛋白質(zhì)組學(xué)分析 目的：建立吲哚美辛處理組與未處理組結(jié)腸癌HCT116細胞裸鼠成瘤組織的雙向凝膠電泳圖譜，分析兩組間差異表達蛋白質(zhì)點； 方法：用雙向凝膠電泳技術(shù)分離吲哚美辛處理組與未處理組裸鼠瘤組織的總蛋白，硝酸銀及膠體考馬斯亮藍染色，

5、Image Scanner掃描儀掃描凝膠，PDQest圖像分析軟件分析比較兩組間的差異表達蛋白質(zhì)； 結(jié)論：雙向凝膠電泳圖譜的建立與優(yōu)化為研究吲哚美辛抗結(jié)腸癌作用奠定了基礎(chǔ)。差異蛋白質(zhì)點的進一步鑒定為揭示IN抗結(jié)腸癌作用的機理提供了實驗基礎(chǔ)。 第二部分：吲哚美辛對結(jié)腸癌細胞成瘤裸鼠作用的差異蛋白質(zhì)鑒定與驗證 目的：鑒定與驗證吲哚美辛對人結(jié)腸癌HCTll6細胞成瘤裸鼠作用的差異表達蛋白質(zhì)，明確IN抗結(jié)腸癌作用的相關(guān)蛋

6、白； 方法：應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析／電離飛行時間質(zhì)譜及電噴霧質(zhì)譜分別獲得經(jīng)膠內(nèi)胰酶酶解的差異蛋白點的質(zhì)譜圖，用Mascot軟件查詢NCBInr和SWISS-PROT‘?dāng)?shù)據(jù)庫鑒定差異蛋白，并應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和蛋白質(zhì)印跡驗證吲哚美辛對部分所鑒定蛋白質(zhì)表達的影響； 結(jié)論：吲哚美辛對HCTll6結(jié)腸癌細胞成瘤裸鼠的作用可能與多種蛋白直接或間接相關(guān)，這些蛋白的研究有助于進一步闡明吲哚美辛抗結(jié)腸癌作用的機制及發(fā)現(xiàn)腫瘤治療藥物的新型靶