普氏原羚腸道微生物多樣性的研究.pdf

1、動(dòng)物胃腸道存在著大量的微生物群落,構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的微生物區(qū)系。這個(gè)復(fù)雜的群落包含有3000～5000種菌,總數(shù)達(dá)1013～1014,而其包含的基因數(shù)目是人基因組的100倍。通過(guò)對(duì)糞便中腸道微生物的研究能獲得大量的生物學(xué)信息,因此它是腸道微生物研究領(lǐng)域的重要材料。方便高效的保存方法是開(kāi)展動(dòng)物腸道微生物研究的重要前提。
　　 珍稀瀕危動(dòng)物的遷地保護(hù)和重引入是動(dòng)物保護(hù)工作者和全社會(huì)共同關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題,但迄今為止難以找到一個(gè)合理的生理指標(biāo)

2、對(duì)兩者進(jìn)行健康評(píng)價(jià)。腸道微生物與哺乳動(dòng)物的食物與能量代謝,及其健康有重要的關(guān)系,并且與宿主有很多相關(guān)性,而且,做為腸道微生物研究樣品的新鮮糞便較動(dòng)物本身來(lái)說(shuō),取樣要方便得多。普氏原羚(Procapra przewalskii)是我國(guó)特有的珍稀動(dòng)物。最新調(diào)查顯示其數(shù)量?jī)H存600余只,處于極瀕危狀態(tài)。
　　 1、本研究選用了4℃保存,-20℃保存,DETs緩沖液和100％乙醇保存等4種方法探討不同保存方法對(duì)糞便中腸道微生物DNA的保

3、存效果,用T-RFLP(末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)結(jié)合16S rDNA分析,對(duì)不同方法不同保存時(shí)間(24h,7天,30天,90天)的DNA保存效果進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明:
　　 (1)4℃保存方法在24小時(shí)內(nèi)保存效果良好,7天的保存效果也尚可,平均92.1％的T-RFs(末端限制性片段)得到保存。不推薦長(zhǎng)期保存使用。
　　 (2)-20℃對(duì)糞便中腸道微生物DNA保存效果最好,30天內(nèi)平均98.9％的T-RFs仍然存在,90天

4、后有一定量腸道微生物的DNA降解,平均有83.1％的T-RFs得到保存。
　　 (3)DETs buffer也能對(duì)糞便中腸道微生物DNA保存有效保存30天,平均95.6％T-RFs得到保存,可方便于地用于野外采樣,但三個(gè)月后其效果低于-20℃保存,并且細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,70.3％的T-RFs得到保存。
　　 (4)100％乙醇在一個(gè)星期內(nèi)保存效果良好,一個(gè)月后微生物群落有一定變化,平均有86.6％的T-RFs得到保存

5、,考慮到其便攜性與方便或得,對(duì)野外采樣較有價(jià)值。
　　 (5)優(yōu)勢(shì)T-RFs(相對(duì)峰面積＞1％)相對(duì)于非優(yōu)勢(shì)T-RFs而言穩(wěn)定性更高。
　　 2、通過(guò)T-RFLP和16S rDNA克隆文庫(kù)構(gòu)建,對(duì)青海省青海湖周邊5個(gè)普世原羚分布區(qū)域野生種群和飼養(yǎng)種群的23個(gè)新鮮糞便樣品腸道微生物多樣性進(jìn)行了研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下:
　　 (1)普氏原羚做為一個(gè)物種總體而言,其各個(gè)個(gè)體間的腸道細(xì)菌具有較高的相似性,不同區(qū)域間個(gè)體腸道細(xì)

6、菌T-RFLP圖譜相似性在50％～60％左右,相同區(qū)域內(nèi)個(gè)體T-RFLP圖譜的相似性一般在70％～80％左右。
　　 (2)不同區(qū)域的野生普氏原羚和圈養(yǎng)普氏原羚的腸道細(xì)菌有其各自的特點(diǎn)。同區(qū)域間個(gè)體T-RFLP圖譜的相似性比區(qū)域外個(gè)體一般要高,各區(qū)域樣品及圈養(yǎng)樣品都有其特有的T-RFs,對(duì)于相對(duì)峰面積最大的T-RFs所代表的優(yōu)勢(shì)菌群而言,野生與圈養(yǎng)樣品有很大的不同。
　　 (3)普氏原羚腸道中存在大量末培養(yǎng)細(xì)菌,做為一個(gè)