川崎病Th17、Treg細(xì)胞異常機(jī)制的初探.pdf

1、目的：研究川崎病(Kawasaki disease，KD)患兒Th17、Treg細(xì)胞異常機(jī)制。
　　方法：KD患兒急性期42例，正常同年齡對(duì)照組32例，KD患兒分別于IVIG治療前、后直接取血備檢。
　　1.采用免疫共沉淀-熒光定量 PCR及印跡法檢測(cè)外周血 CD4細(xì)胞 IL-17基因H3K4me3、H3K27me3修飾水平和IL-17基因組蛋白H3乙?；?、Foxp3蛋白泛素化水平；
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+IL

2、-17+細(xì)胞/輔助性T細(xì)胞17(Th17)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)比例及Foxp3、IL-10、IL-17、HIF-1α、pSTAT3蛋白表達(dá)水平；
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)CD4+T細(xì)胞IL-17、IL-6Rα、gp130、IL-23R、IL-23Rβ1、ETV5、SOCS1、SOCS3、TLR4、MyD88/TRIF、TNFR1、RIP1、RORγt、p300 mRNA及miR155表達(dá)；
　　4.血漿中用ELI

3、SA檢測(cè)TNF-α、IL-1β、IL-23、IL-21、IL-6濃度。
　　結(jié)果：1.KD患兒急性期Th17細(xì)胞比例、IL-17蛋白表達(dá)及H3K4me3水平顯著增高、H3K27me3水平明顯降低(P<0.05)，且H3K4me3/H3K27me3比值與IL-17 mRNA水平呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.69, P<0.05)，其中 KD合并冠狀動(dòng)脈損傷組（KD-CAL+）Th17細(xì)胞比例、IL-17表達(dá)及H3K4me3水平均高于無(wú)冠狀動(dòng)

4、脈損傷組（KD-CAL-）、H3K27me3水平則低于后者(P<0.05)，Treg細(xì)胞比例及轉(zhuǎn)錄因子Foxp3、IL-10表達(dá)明顯降低，Th17/Treg細(xì)胞比值遠(yuǎn)高于對(duì)照組(P<0.05)，經(jīng)IVIG治療后均明顯恢復(fù)(P<0.05)；
　　2.KD患兒急性期CD4+T細(xì)胞pSTAT3、ETV5、miR155表達(dá)均顯著上調(diào)(P<0.05)， pSTAT3負(fù)性調(diào)節(jié)因子SOCS1、SOCS3表達(dá)明顯降低(P<0.05)，其中KD-C

5、AL+組前三項(xiàng)表達(dá)均高于KD-CAL-組(P<0.05)，而后二項(xiàng)表達(dá)則明顯低于后者(P<0.05)，IVIG治療后都有不同程度恢復(fù)(P<0.05)；
　　3.KD患兒急性期血漿IL-1β、IL-6、IL-21、IL-23、TNF-α濃度及CD4+ T細(xì)胞pSTAT3、TLR4/MyD88/TRIF、IL-6Rα/gp130、IL-23R/IL-23Rβ1、TNFR1/RIP1表達(dá)均顯著上調(diào)(P<0.05)，其中KD-CAL+組前

6、述多項(xiàng)均高于KD-CAL-組(P<0.05)，經(jīng)IVIG治療后均明顯降低(P<0.05)；
　　4.KD患兒急性期CD4+T細(xì)胞IL-17基因組蛋白H3乙?；郊癋oxp3蛋白泛素化水平顯著上升(P<0.05)，HIF-1α、RORγt及p300表達(dá)對(duì)于同年齡對(duì)照組也明顯增高(P<0.05)，IVIG治療后可見(jiàn)下降(P<0.05)。其中，HIF-1α表達(dá)與IL-17基因組蛋白 H3乙?；?、Foxp3蛋白泛素化水平呈正相關(guān)關(guān)系