Th17細胞在川崎病發(fā)病機制中的作用研究.pdf

1、川崎病(KD)是兒童最常見的一種自限性的自身免疫性血管炎綜合癥,自1967年日本人首次報道川崎病以來,該病在世界范圍各種族兒童中均有報道。以持續(xù)性發(fā)熱、口唇潮紅、球結合膜充血、手足硬腫脫屑等皮膚、粘膜、淋巴結的炎性癥狀為主要臨床表現(xiàn)。KD以免疫系統(tǒng)活化和血管內皮系統(tǒng)廣泛損害為特征,主要累及全身中小動脈,特別是冠狀動脈,部分患兒冠脈擴張可形成冠狀動脈瘤,少部分患兒冠狀動脈可發(fā)生狹窄或血栓,甚至導致心肌梗死。川崎病已經(jīng)超過風濕熱成為兒童后天

2、性心臟病的首要因為,也是成人后發(fā)生冠狀動脈損傷的重要因為。
　　 40多年以來KD一直受到兒科學和免疫學家的高度重視,從病因,發(fā)病機制,治療,預后及干預因素等方面進行了廣泛研究,但KD免疫發(fā)病機制迄今未完全闡明,大量流行病學及臨床觀察提示:感染因素所觸發(fā)的急性炎癥和免疫調節(jié)紊亂是KD發(fā)生冠脈病變的關鍵。已有報道多種細菌,病毒,支原體及其代謝產(chǎn)物導致免疫細胞,尤其是CD4+T細胞異?；罨?產(chǎn)生多種炎癥細胞因子,如:IL-6、IL-

3、8、TNF-α等在KD患兒急性期高表達,特別是IL-6可能參與血管內皮損傷,與KD患兒冠脈損害有關。在參與本病發(fā)病過程的眾多活化、升高的炎癥細胞和分子中,是否有急性炎癥反應的啟動因素和轉歸的樞紐尚不清楚。
　　 Th17細胞足近年發(fā)現(xiàn)不同于Th1和Th2,具有產(chǎn)生白細胞介素-17(IL-17)功能的又一群CD4+輔助性T細胞亞群,具有很強的促炎作用。介導炎癥反應(防御胞外細菌,真菌感染),參與自身免疫性疾病,移植排斥反應和腫瘤免

4、疫過程。Th17及其產(chǎn)生的細胞因子IL-17在多種急慢性炎癥和自身免疫性疾病的調節(jié)軸中占據(jù)中心位置如:類風濕關節(jié)炎(RA)、炎癥性腸病等(IBD)、多發(fā)性硬化(MS)等。膠原誘導性關節(jié)炎(CIA)和實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)分別作為RA和MS的動物模型,在IL-17缺陷的小鼠中,其病情的進展明顯緩慢。目前研究也表明RORγt是掌管Th17分化的關鍵轉錄因子,它誘導編碼IL-17的基因轉錄,使初始CD4+T在IL-6和TGF-β的

5、作用下分化為Th17細胞。但有關Th17和KD急性期的炎癥關系尚未見報道。
　　 Treg是一類具有免疫抑制作用的T細胞亞群,有抑制自身免疫T細胞活化和維持自身免疫耐受的功能。其數(shù)量的減少或功能障礙可引起自身免疫功能紊亂。目前在多種疾病及動物模型中發(fā)現(xiàn)Treg數(shù)目減少,Th17數(shù)目增多,Th17/Treg失衡。但在急性期KD患兒體內是否存在Th17/Treg失衡尚不清楚。
　　 本文探討KD患兒急性期Th17細胞、Tre

6、g數(shù)量的變化及Th17細胞相關的轉錄因子及細胞因子水平,旨在進一步探討KD的免疫發(fā)病機制。
　　 目的:1、通過總結43例急性期川崎病患兒臨床病史資料進一步了解川崎病的臨床特點和危害性；
　　 2、流式細胞術分別檢測KD患兒急性期外周血Th17細胞、Treg比例及IVIG后隨訪患兒Th17細胞比例,初步探討Th17細胞在川崎病(KD)發(fā)病中的作用；
　　 3、檢測Th17細胞特異的轉錄因子RORγt的表達,及相關

7、細胞因子IL-6、IL-2水平,探討川崎病急性期Th17細胞增高的機制；
　　 方法:1、總結43例急性期川崎病患兒臨床病史資料；
　　 2、流式細胞術分別檢測KD患兒急性期(IVIG前)、正常體檢兒童外周血PBMC中Th17細胞,CD4+CD25+FOXP3+調節(jié)性T細胞(Treg)占CD4+細胞的比例,及IVIG后隨訪患兒Th17細胞比例；
　　 3、熒光定量PCR檢測RORγt、IL-23p19基因mRNA

8、的表達；
　　 4、雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清IL-6水平；
　　 結果:1、43例患兒中典型川崎病37例(86％)；不典型川崎病6例(14％),所有患兒均有高熱(100％),熱程4-12天,平均熱程7.40±1.87天,其中兩例冠脈瘤患兒熱程分別為9天、10天,而不典型KD熱程并無明顯延長；雙側結膜充血34例(79.1％)；唇紅、皸裂36例(83.7％)；楊梅舌23例(53.5％)；皮疹28例(65

9、.1％)；手足硬腫、指趾端脫屑34例(79.1％)；頸淋巴結腫大33例(76.7％)；冠狀動脈有損害(CAL)者34例(79.1％),其中冠脈瘤兩例；實驗室檢查發(fā)現(xiàn)急性期患兒白細胞總數(shù)及粒細胞增高(16.38±15.62～109/L),血沉明顯增快(44.76±27.68 mm/1 h),C反應蛋白增高(85.07±70.44mg/L),兩例冠脈瘤患兒血沉、CRP明顯升高；在IVIG治療后這些炎性指標顯著下降(P<0.01)；
　

10、　 2、急性期KD患兒外周血Th17細胞占CD4+細胞的比例顯著高于健康對照組[KD:(1.272±0.622)％、對照:(0.5924±0.344)％](P<0.01)；用WIG后隨訪患兒Th17細胞數(shù):(0.663±0.478),較用IVIG前顯著下降(P<0.01)；急性期KD患兒外周血CD4+CD25+FOXP3+的調節(jié)性T細胞(Treg)比與健康對照組比較無顯著差異[KD:(3.944±2.724)％、對照:(4.8074±

11、2.045)％](P>0.05)。
　　 3、急性期KD患兒Th17細胞轉錄因子RORγt的基因表達量:(M:5.62,Q:7.16),顯著高于同齡健康對照組(M:1.79,Q:2.55),(P<0.01)。IL-23p19的基因表達量:(M:2.12,Q:3.05),與正常同齡健康對照組比較無顯著差異(M:1.73,Q:2.79),(P>O.05)。
　　 4、急性期KD患兒血清IL-6水平顯著增高:[病人:(M:36

12、.42,Q:129.77)、對照:(M:2.39,Q:1.15)](P<.01),且有冠脈損害患兒IL-6水平(M:66.91,Q:194.24)顯著高于無冠脈損害組(M:8.82,Q:14.73),(P<0.05)；且IL-6水平與Th17細胞比例成正相關(r=0.88 P<0.01)。
　　 結論:1、本組KD病例臨床特征:43例急性期KD患兒中包括37例典型KD,6例不典型KD；心臟彩超檢查可發(fā)現(xiàn)冠脈擴張34例,冠脈瘤2例

13、；實驗室檢查外周血白細胞,血沉、血小板,CRP升高,部分心肌酶譜及免疫球蛋白水平升高,尤其是冠脈瘤患兒熱程較長,炎性指標明顯升高,不典型KD各項炎性指標較典型者并無明顯升高；IVIG治療后,CRP、血沉、白細胞等炎性指標明顯下降,僅血小板無明顯下降反而輕度升高。
　　 2、KD患兒Th17細胞及Treg比例:急性期KD患兒外周血Th17細胞占CD4+細胞的比例顯著高于同齡健康對照組,且在IVIG治療后下降明顯；而急性期KD患兒C

14、D4+CD25+FOXP3十的調節(jié)性T細胞(Treg)占CD4+細胞的比例與同齡健康組比較無顯著差異；在急性期KD患兒體內,可能不存在Th17/Treg失衡,可能是在急性炎癥的早期,Th17介導的炎癥反應占據(jù)了主要作用；
　　 3、轉錄因子RORγ及IL-6、IL-23p19水平:急性期KD患兒Th17細胞轉錄因子RORγt的表達顯著高于同齡健康對照組,其相關細胞因子IL-6也顯著升高,尤其是在有冠脈損害的患兒。且IL-6水平與