Th17細胞在重癥肌無力發(fā)病機制中的作用.pdf

1、重癥肌無力( myasthenia gravis，MG)和它的動物模型實驗性自身免疫性重癥肌無力(experimental autoimmune myasthenia gravis，EAMG)均為自身抗體介導的神經肌肉接頭( neuromuscular junction，NMJ)疾病，NMJ突觸后膜煙堿型乙酰膽堿受體( acetylcholine receptor，AChR)是大多數(shù)病人自身抗體攻擊的主要靶點。MG和EAMG的這些抗體的

2、產生依賴于輔助T細胞( helper T cell，Th)和它們產生的細胞因子。Th17為一種新定義的Th類細胞，與自身免疫性疾病關系密切，為了明確Th17細胞在MG中的作用，本研究以EAMG模型和病人胸腺瘤組織為研究對象，采用免疫學和分子生物學技術，研究Th17細胞在MG發(fā)病中的作用，結果顯示：自身反應性Th17細胞具有驅使EAMG致病性抗體產生的作用，并且MG病人的胸腺瘤組織高表達IL-17。本研究提示Th17細胞是導致MG的關鍵因

3、素，可以作為免疫治療的新靶點。
　　 初始T細胞分化成Th亞群需要固有免疫和適應性免疫系統(tǒng)相互作用，因此本研究首先探討了單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractantprotein1，MCP-1，也稱CC chemokine ligand2，CCL2)在EAMG發(fā)病機制中的作用。CCL2在C57BL/6(B6)小鼠的脾和淋巴結表達增高，CCL2缺乏(CCL2--)小鼠抵抗EAMG誘導，CCL2-/-小鼠血

4、清抗AChR IgG、IgGl和IgG2a抗體水平與B6小鼠相似，但IgG2b水平明顯減少，提示IgG2b水平低下是CCL2-/-小鼠能抵抗EAMG誘導的原因。CCL2-，-小鼠B細胞在體外增殖、分化成漿細胞、產生IgG抗體和遷移到次級淋巴器官的功能均正常，分泌IFN-γ(Th1)和IL-4(Th2)的CD4+T細胞數(shù)量略少于B6鼠，但是分泌IL-17的CD4+T細胞即Th17細胞卻明顯少于B6鼠，表明CCL2-/-小鼠IgG2b水平的

5、低下與Th17細胞數(shù)量不足有關。因此CCL2在EAMG發(fā)病中的作用是驅使Th17細胞的發(fā)生，之后Th17細胞輔助B細胞產生致病性IgG2b抗體介導NMJ傳導功能阻滯，形成EAMG。
　　 繼之的研究表明缺乏CCL2導致產生IL-6的CDllb+單核細胞歸巢障礙，從而影響AChR反應性Th17細胞的分化，揭示了CCL2驅使Th17發(fā)生的機制是通過聚集CDllb+細胞歸巢到次級淋巴器官產生IL-6來促使Th17細胞分化。IL-6缺乏

6、(IL-6-/-)小鼠抵抗EAMG的誘導緣于體內Th17細胞分化障礙，說明IL-6促使體內Th17細胞的分化來介導EAMG發(fā)病。
　　 通過給EAMG小鼠直接注射IL-17進一步探討Th17在MG發(fā)病機制中的作用。外源性IL-17可致B6小鼠EAMG特征加重并且抗AChR特異性IgG2b抗體水平明顯升高。給IFN-y缺乏(IFN-γ-/-)小鼠注射IL-17，可以誘導較嚴重的EAMG癥狀，說明是IL-17而不是IFN-γ更影響E

7、AMG的形成，Th17細胞促進EAMG形成的作用不依賴于Th1細胞。對AChR有免疫性的供體小鼠的Th17細胞可介導受體重組活化基因1(recombinant active gene1，RAGl)敲除(RAGl-/-)小鼠形成EAMG，IL-17缺乏(IL-17-/-)小鼠抵抗EAMG的誘導，進一步顯示了Th17細胞在MG發(fā)病中的作用。
　　 為了檢驗Th17細胞在胸腺瘤合并MG發(fā)病機制中的作用，對行胸腺切除手術的27例胸腺瘤患

8、者的相關資料進行了回顧分析，并將切除的胸腺瘤組織蠟塊標本切片用免疫組化方法確定MCP-1、IL-17、IL-6細胞因子及CDllb+和CD4+細胞在胸腺瘤組織中的表達情況。結果顯示越年輕的男性胸腺瘤患者越容易伴發(fā)MG，B1和B2型為主的胸腺瘤合并MG的可能性較大，而C型(惡性腫瘤)合并MG的可能性極小；II型病理多表現(xiàn)為B1和B2型，越是良性的胸腺瘤越易發(fā)生MG，淋巴細胞型胸腺瘤易伴發(fā)MG；胸腺瘤合并MG的胸腺瘤組織高表達CCL2、IL

9、-6和IL-17細胞因子及CDllb+細胞和CD4+細胞。
　　 總之，本研究可以得出以下結論：在EAMG發(fā)病機制中CCL2介導CDllb+單核細胞歸巢次級淋巴器官，產生細胞源性的IL-6促進自身反應性Th17細胞分化，之后Th17細胞作用于B細胞產生能與補體結合的高致病性抗AChR IgG2b抗體，導致NMJ傳導障礙，形成EAMG。CCL2在調整產生IL-6的CDllb+細胞、Th17細胞和B細胞之間相互影響中起重要作用，這些