p53蛋白單、多克隆抗體的制備及免疫組化的研究.pdf

1、人類p53基因存在于17p13.1染色體上，編碼分子量為53kDa的核磷酸化蛋白，p53基因是迄今發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因。P53基因突變及其表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤發(fā)生時(shí)常伴隨發(fā)生，且p53表達(dá)者預(yù)后較差，提示其與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，檢測(cè)其基因突變株及表達(dá)產(chǎn)物有助于腫瘤的診斷。p53基因突變后導(dǎo)致蛋白的組化性質(zhì)發(fā)生改變，蛋白的穩(wěn)定性大大增加，可通過(guò)分子生物學(xué)方法、免疫組化法、血清學(xué)等多種方法分析。而免疫組化方法是目前臨床上對(duì)腫瘤，特別是

2、疑難腫瘤分析檢測(cè)所采用的重要方法，可以利用它分析p53基因突變誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白在腫瘤組織中的情況。 本實(shí)驗(yàn)利用本實(shí)驗(yàn)組構(gòu)建的PQE-p53表達(dá)質(zhì)粒，在大腸桿菌M15表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行p53表達(dá)。建立p53蛋白在原核生物中的表達(dá)純化方法，制備純化的p53蛋白及相對(duì)抗體。目前雖然用于p53抗原檢測(cè)的單、多抗很多，但大多是進(jìn)口產(chǎn)品。所以基于以上情況我們嘗試制備出可用于檢測(cè)的單、多克隆抗體對(duì)腫瘤石蠟切片進(jìn)行免疫分析，與進(jìn)口產(chǎn)品其相比價(jià)格會(huì)大