P糖蛋白與PCNA、CD34在骨肉瘤中的表達及臨床意義.pdf

1、目的:骨肉瘤是一種青少年患者最常見的骨的原發(fā)性惡性腫瘤，手術切除腫瘤是骨肉瘤綜合治療中最重要的一部分，而化療一直是最重要的輔助治療手段，化療不但能殺滅殘留或擴散的腫瘤細胞，也對控制腫瘤復發(fā)有效。近期研究表明骨肉瘤患者治療過程中均有不同程度的耐藥。通過臨床觀察及查閱文獻，發(fā)現導致患者死亡的原因主要是肺轉移，其中耐藥的產生是骨肉瘤遠處轉移的重要原因之一。因此，由MDR-1/P糖蛋白介導的多藥耐藥機制對治療效果的影響引起了廣泛關注。目前，以M

2、DR-1/P-gp為基礎逆轉惡性腫瘤耐藥是目前一個研究熱點。P糖蛋白(P-gp)是由多重耐藥基因(MDR-1)編碼的膜糖蛋白，它可以消耗ATP將進入細胞內的藥物泵出細胞外，消除藥物對腫瘤細胞的殺傷作用，導致腫瘤細胞產生抗藥性。但P-gp不是腫瘤細胞特有的表達蛋白，它在正常組織中也有不同程度的表達，主要見于一些具有分泌、排泄功能的組織或器官。P-gp在病理上，可以促進腫瘤細胞內的藥物泵出細胞外，從而介導腫瘤MDR的產生，在生理上，減少組織

3、細胞對外源性毒物吸收，從而保護機體，這也可能是某些腫瘤最初對化療不敏感的原因。P-gp介導的MDR的逆轉劑是目前研究較早、研究最為廣泛及最經為典的一種逆轉MDR的策略，一直是骨肉瘤治的研究方向之一。此外，P-gp介導的骨肉瘤耐藥還與MDR-1基因的表達、細胞信號傳導通路、免疫等多方面相關。因此，關于P糖蛋白在惡性腫瘤的表達研究中已趨于白熱化階段。增殖細胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCN

4、A）主要反映細胞核內DNA增殖情況，在DNA合成期前期和合成期大量出現，PCNA的大量表達提示腫瘤生長旺盛，一方面反映惡性程度高，一方面反映化療效果不明顯，腫瘤有死灰復燃的可能，因此可以作為判定化療療效的一個指標。PCNA反義寡核苷酸是在基因水平通過抑制細胞核內遺傳物質增殖的一種最新研制的藥物，它將PCNA作為反義核酸治療的靶分子，抑制PCNA基因表達，使細胞停止增殖或處于靜止期。通過反義技術抑制PCNA基因的表達，顯著抑制腫瘤細胞增殖

5、，而對正常細胞影響很小。CD34是一種粘附分子，主要在內皮細胞表達，在細胞間粘附過程中發(fā)揮重要作用，是腫瘤微血管（Microvessel density，MVD）常用的標記蛋白，通過計算MVD，可以評估腫瘤血管形成情況，同時它也對腫瘤細胞增殖、分化、遷移具有重要意義。腫瘤的生長，轉移需要血液供應營養(yǎng)物質。血管是腫瘤形成一個重要原因，腫瘤血管抑制劑比較容易達到靶細胞，發(fā)揮其抗血管形成等作用，并且不易產生耐藥，毒性作用小，與化療藥物聯用，可

6、以提高傳統(tǒng)化療的效果，通過血管抑制劑，抑制血管生成或促進內皮細胞凋亡，使轉移灶處于靜止狀態(tài)，抑制腫瘤的復發(fā)和轉移。由于抗腫瘤血管形成基因治療不受腫瘤細胞周期的影響，故而是其他治療方案的良好補充。目前大量實驗證實，P糖蛋白、PCNA、CD34在人骨肉瘤中高表達，且作為腫瘤細胞靶蛋白在各自腫瘤治療過程中已獲取的客觀療效，但腫瘤多藥耐藥的產生是否與腫瘤增殖相關？是否與血管形成有關，國內報道尚少且存在爭議。本研究通過選取51例人骨肉瘤標本，按E

7、nneking分期系統(tǒng)分為Ⅰ期11例，Ⅱ期20例，Ⅲ期20例。以20例骨軟骨瘤作為對照。通過免疫組織化學染色，以P-gp、PCNA、CD34標記的MVD分別代表腫瘤的耐藥、腫瘤的增殖及腫瘤血管形成三方面，探討P-gp蛋白在骨肉瘤中的表達及其與PCNA、CD34的相互關系及臨床指導意義。
　　方法:病歷資料和腫瘤標本均來自河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院2007年1月至2012年1月手術切除的骨肉瘤標總共51例，其中有肺轉移者15例，無肺轉移者

8、36例。發(fā)生在股骨者20例，脛骨18例，其他部位13例。采用免疫組化染色方法Envision兩步法測骨肉瘤中PCNA與CD34及P糖蛋白的表達。
　　結果:PCNA蛋白陽性表達率:骨軟骨瘤組為10％(2/20);骨肉瘤組為58.9％(30/51)，差異有顯著性。CD34蛋白標記的MVD值:骨肉瘤中MVD值為53.47±6.39;骨軟骨瘤中MVD值為18.20±4.55，差異有統(tǒng)計學意義。P糖蛋白陽性表達率:骨肉瘤為45.1％(23

9、/51)，骨軟骨瘤為5％(1/20)。與對照組相比，P糖蛋白、PCNA、CD34在骨肉瘤組織中的表達明顯增加，以上差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。P糖蛋白的表達在骨肉瘤的Enneking、復發(fā)分期和轉移的患者中差異有統(tǒng)計學意義，與性別、年齡、發(fā)病部位和腫瘤直徑差異無統(tǒng)計學意義;PCNA與骨肉瘤的Enneking分期、肺轉移、復發(fā)和腫瘤直徑差異有統(tǒng)計學意義，與性別、年齡、發(fā)病部位差異無統(tǒng)計學意義;CD34標記的MVD與Enneking

10、分級及腫瘤直徑相關，而與性別、年齡、發(fā)病部位、肺轉移和復發(fā)無關。Spearman等級相關分析顯示P糖蛋白表達強度與PCNA蛋白表達強度呈顯著正相關，R=0.581，P＜0.05，P糖蛋白與CD34標記的MVD之間相關無顯著性。
　　結論:P糖蛋白雖然不是骨肉瘤腫瘤特異性表達的蛋白，但惡性腫瘤其表達明顯上調，但仍可作為一個判斷腫瘤性質的指標，而且可以評估為患者的預后，為臨床醫(yī)師制合理治療方案提供一個依據。PCNA可以獨立作為判斷骨肉

11、瘤患者預后的指標，與P糖蛋白聯合應用可能會做出更準確的評估，為臨床指導用藥提供依據。幾乎所有骨肉瘤組織CD34均有陽性表達，意味著惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與血管形成密切相關。但其與P-gp表達無相關性。MVD可以作為評估患者預后的獨立因素，為臨床指導用藥，腫瘤的耐藥可能與血管的形成無關，或者需擴大樣本量進一步研究。骨肉瘤治療過程中產生耐藥，到目前為止是一個沒有得到解決的臨床難題，對耐藥機制的深刻理解深入研究非常重要，只有經多方面的綜合治療，才