腸道菌群與小細(xì)胞肺癌化療相關(guān)性腹瀉關(guān)系的研究.pdf

1、小細(xì)胞肺癌(Small Cell Lung Cancer, SCLC)是一種高侵襲性的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤,它具有發(fā)展迅速、早期出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、對(duì)化療高度敏感,但容易復(fù)發(fā)等特點(diǎn),超過(guò)半數(shù)的患者在確診時(shí)處于廣泛期(Extensive disease,ED)。依據(jù)最新NCCN指南,SCLC的治療仍以全身化療為主。化療相關(guān)性腹瀉(Chemotherapy InducedDiarrhea,CID)是化療常見的并發(fā)癥,輕則會(huì)導(dǎo)致患者的體質(zhì)和生活質(zhì)量的下降

2、,降低患者的依從性,影響化療的療效,增加治療費(fèi)用,嚴(yán)重時(shí),還可引起患者體內(nèi)水、電解質(zhì)紊亂,造成低血容量性休克,進(jìn)而危及生命。目前關(guān)于CID的具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚,有研究報(bào)道腫瘤CID與腸道菌群的改變有關(guān),探究腸道菌群的改變與SCLC化療相關(guān)性腹瀉的關(guān)系,對(duì)SCLC患者的治療和生存具有深遠(yuǎn)意義。
　　目的:
　　探索小細(xì)胞肺癌化療相關(guān)性腹瀉與腸道菌群變化的關(guān)系,為小細(xì)胞肺癌化療相關(guān)性腹瀉的防治提供新思路。
　　方法:

3、r>　　1、樣本收集:采集大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院腫瘤科18例經(jīng)病理確診為小細(xì)胞肺癌患者,化療前和化療后出現(xiàn)CID的糞便(其中10例患者經(jīng)EP方案化療,8例經(jīng)IP方案化療),放置于-80℃冰箱冷凍保存。
　　2、樣本DNA提取:分別提取小細(xì)胞肺癌患者化療前和化療后出現(xiàn)CID糞便樣本的腸道微生物基因組DNA。
　　3、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE):以糞便總DNA為模板,細(xì)菌16S rDNA V3區(qū)特異性

4、引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物行1.5％的瓊脂糖凝膠電泳,以檢測(cè)目的條帶,進(jìn)一步行DGGE,對(duì)所得DGGE指紋圖譜進(jìn)行分析,對(duì)差異比較明顯的條帶進(jìn)行切膠測(cè)序,以分析其種屬類別,探索小細(xì)胞肺癌患者化療前與化療后出現(xiàn)CID的腸道菌群變化。
　　結(jié)果:
　　1、DNA提取情況:18例SCLC患者化療前和化療后出現(xiàn)CID的糞便均可提取出DNA,各DNA樣本濃度高低不同。
　　2、EP方案化療組的腸道菌群特征:由聚類分析和PCA主

5、成分分析圖可以看出,化療前組與化療后組形成了兩個(gè)聚類群,差異顯著。與化療前組相比,化療后組腸道細(xì)菌豐度增加(P＞0.05);多樣性指數(shù)升高(P＞0.05),差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)化療后亮度明顯增高的1、2、3條帶進(jìn)行切膠測(cè)序,結(jié)果顯示,條帶1、2可能為普氏糞桿菌(Faecalibacterium prausnitzii),同源性分別為85％和93％;條帶3為肺炎克雷伯菌(Klebsiella quasipneumoniae),同源性為9

6、9％。
　　3、IP方案化療組的腸道菌群特征:由聚類分析和PCA主成分分析圖可以看出,化療前組與化療后組形成了兩個(gè)聚類群,差異顯著。與化療前組相比,化療后組腸道細(xì)菌豐度降低(P＞0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;多樣性指數(shù)降低(P＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)化療后亮度明顯降低的4、5條帶進(jìn)行切膠測(cè)序,結(jié)果顯示,條帶4可能為桿菌屬(Prevotella stercorea),同源性為94％;條帶5可能為Unculturedbact