RhoGDI2在結(jié)直腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及EMT中的作用研究.pdf

1、目的：
　　鳥苷酸解離抑制因子2（Rho GDP dissociation inhibitor2，RhoGDI2）是RhoGTP酶（Rho GTPases）的調(diào)節(jié)因子之一，已被發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)于多種惡性實(shí)體腫瘤之中，在不同類型或不同遺傳背景的腫瘤中的表達(dá)及作用截然不同。有關(guān)RhoGDI2在結(jié)直腸癌中的作用目前仍存在爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)通過研究結(jié)直腸癌相關(guān)組織及細(xì)胞株中RhoGDI2的表達(dá)，探討其在結(jié)直腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及EMT中的作用，為尋

2、找結(jié)直腸癌防治新的靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　?。?）運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)結(jié)直腸癌原發(fā)灶癌組織、癌旁非癌組織、轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)癌組織中RhoGDI2的表達(dá)；檢測(cè)結(jié)直腸癌原發(fā)灶癌組織、癌旁非癌組織中EMT標(biāo)志物（E-cadherin、Vimentin）的表達(dá)。分析RhoGDI2的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，探討RhoGDI2與E-cadherin、Vimentin三者間表達(dá)的相關(guān)性。
　　（2）運(yùn)用Real-time

3、 PCR和Western blot檢測(cè)人結(jié)直腸癌細(xì)胞株（SW480、LoVo、HT-29、SW620）中RhoGDI2的表達(dá)水平。利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)SW480細(xì)胞中RhoGDI2表達(dá)水平，RNA干擾技術(shù)下調(diào)SW620細(xì)胞中RhoGDI2表達(dá)水平，通過顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖及凋亡的改變，Transwell和劃痕愈合試驗(yàn)檢驗(yàn)細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化，Real-time PCR和Western blot檢測(cè)

4、EMT標(biāo)志物（E-cadherin、Vimentin）表達(dá)水平的改變。
　　結(jié)果：
　　（1）RhoGDI2在結(jié)直腸癌相關(guān)組織中存在差異性表達(dá)（轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)癌組織＞原發(fā)灶癌組織＞癌旁非癌組織，P＜0.05）。RhoGDI2在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、周圍淋巴管浸潤(rùn)、周圍神經(jīng)浸潤(rùn)及TNM分期相關(guān)（P＜0.05）。RhoGDI2表達(dá)的結(jié)直腸癌患者5年生存率顯著降低（P＜0.05），RhoGDI2

5、表達(dá)是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的獨(dú)立因素之一（P＜0.05）。結(jié)直腸癌組織中RhoGDI2與Vimentin的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.295，P＜0.05），與E-cadherin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.278，P＜0.05）。
　?。?）RhoGDI2的表達(dá)水平在結(jié)直腸癌SW480、HT-29細(xì)胞株中較低，LoVo、SW620細(xì)胞株中較高。上調(diào)SW480細(xì)胞中RhoGDI2表達(dá)水平后，細(xì)胞形態(tài)由類圓形緊密排列向紡錘形疏松排列轉(zhuǎn)變；細(xì)胞增

6、殖和凋亡水平無明顯改變（P＞0.05）；細(xì)胞侵襲和遷移能力增強(qiáng)（P＜0.05）；細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)水平下降（P＜0.05），Vimentin表達(dá)水平升高（P＜0.05）。下調(diào)SW620細(xì)胞中RhoGDI2表達(dá)水平后，細(xì)胞形態(tài)由紡錘形疏松排列向類圓形緊密排列轉(zhuǎn)變；細(xì)胞增殖和凋亡水平無明顯改變（P＞0.05）；細(xì)胞侵襲和遷移能力減弱（P＜0.05）；細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)水平升高（P＜0.05），Vimentin表達(dá)水平