pBC-rtTA轉基因小鼠模型的建立和應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、四環(huán)素調控系統(tǒng)是對外源基因的表達水平進行嚴格控制的一種轉基因技術，它能在轉錄水平上調控轉入基因進行組織特異或發(fā)育階段特異表達，同時還能控制其表達時間和表達量，就如在目的基因上加了個有效的“基因開關”。Tet-on系統(tǒng)中rtTA是反式四環(huán)素調控激活因子，它的作用跟tTA作用相反。Tet-on系統(tǒng)有效的調控基因的轉錄表達。猿猴病毒40T抗原基因(SV40T)具有轉化動物細胞和誘發(fā)腫瘤的特性。SV40Tag基因已被確認為癌基因，SV40是基本

2、的病毒致癌物質。 本研究利用分子生物學的基因克隆手段從tet-on載體上獲得片段rtTA，基因克隆進乳腺特異性表達載體pBC中，成功構建了重組基因pBC-rtTA，運用雄原核顯微注射法制備轉基因小鼠，先后共注射477枚FVB小鼠受精卵，出生小鼠為117只，其中5只為pBC-rtTA轉基因陽性小鼠，顯微注射陽性率較高約為5％(5/117)為了避免PCR技術造成的假陽性存在，實驗還進行了Southernblotting，結果顯示5

3、只小鼠的基因pBC-rtTA都整合于DNA中，將5只轉基因首建鼠與正常FVB小鼠交配后，F1代外源基因pBC-rtTA的陽性率為50％，符合孟德爾遺傳定律，說明pBC-rtTA基因穩(wěn)定遺傳。將該小鼠與本實驗室已有的轉基因小鼠TRE-SV40Tag進行交配即四環(huán)素調控中反應元件轉基因小鼠，共出生34只小鼠，PCR檢測：4只為雙陽性轉基因小鼠。其中31＃pBC-rtTA轉基因小鼠首建鼠其后代雙陽性小鼠經強力霉素飲水的誘導35d后提取心、腦、

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