包蟲病所致過敏反應中免疫耐受機制的實驗研究.pdf

1、目的：包蟲病是全球人畜共患性疾病。包蟲病所致的過敏性休克是其嚴重并發(fā)癥，占包蟲病患者突然死亡原因的20％。包蟲病患者存在免疫耐受已被證實，但是這種狀態(tài)在包蟲囊液外溢時發(fā)生轉變，過敏性休克發(fā)生，具體機制尚待闡明。為此，本研究在完善囊型包蟲病所致過敏反應動物模型、優(yōu)化小鼠過敏反應評價體系的基礎上，探討以Treg細胞為核心的“免疫耐受調節(jié)網絡”中相關重要因子在囊型包蟲病所致過敏反應中的變化及特點，以及地塞米松預處理對囊型包蟲病所致過敏反應的影

2、響及機制，為制定針對囊型包蟲病所致過敏反應的有效防治策略奠定理論基礎。
　　方法：⑴羊源細粒棘球蚴原頭節(jié)及囊液均采自包蟲感染羊肝臟。包蟲感染組，每只小鼠通過腹腔接種粒棘球蚴原頭節(jié)2000個，建立囊型包蟲感染模型，再應用羊源細粒棘球蚴粗制囊液0.1ml/10g攻擊發(fā)敏建立囊型包蟲病所致過敏反應模型。通過觀察過敏癥狀、肛溫變化、肺組織HE染色病理切片，測定肺泡灌洗液中白細胞分類計數(shù)、過敏介質組胺及 PAF-AH水平，測量血清抗體水平等

3、一系列指標，全面優(yōu)化過敏評價體系，完善過敏模型建立；⑵BALB/c小鼠隨機分成健康對照組、包蟲感染組、囊液致敏組。使用全面的過敏評價體系評價過敏模型。FCM檢測小鼠淋巴結來源PBMCs中DCs、Treg細胞水平，ELISA檢測血清IgE、IgG、IgG1、IL-10、TGF-β1、IL-13、IL-17A水平；⑶C57BL/6小鼠隨機分成健康對照組、單純囊液致敏組，地塞米松預處理組。在包蟲囊液致敏前30min腹腔注射地塞米松建立地塞米松

4、預處理模型。使用全面的過敏評價體系評價過敏模型。FCM檢測小鼠淋巴結來源 PBMCs中Treg細胞水平，ELISA檢測血清IgE、IgG、IgG1、IL-10、TGF-β1、IL-13水平。
　　結果：①BALB/c小鼠包蟲接種成功率為75%，C57BL/6小鼠包蟲接種成功率為65%，囊型包蟲病所致過敏模型成功率為分別為93.33%和85.62%。發(fā)生過敏反應小鼠出現(xiàn)了不同程度的過敏癥狀、肛溫下降、肺組織HE病理切片及BALF中炎

5、性細胞增加、組胺表達量增加、血清抗體IgE、IgG、IgG1水平增加。上述指標均表明BALB/c和C57BL/6小鼠囊型包蟲病所致過敏反應模型建立成功；②與健康對照組相比，包蟲感染組及囊液致敏組小鼠血清IgE水平均明顯增加（P＜0.01）。囊液致敏組小鼠血清IgE水平明顯高于包蟲感染組(P＜0.05)。囊液致敏后，肺組織病理及BALF中炎性細胞增加、組胺表達水平增加、血清IL-13、IL-17A水平增加（P＜0.05）。與健康對照組相比

6、，小鼠血清IL-10、TGF-β1水平及CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+細胞比例在包蟲感染組增加，在囊液致敏組下降（P＜0.001），呈現(xiàn)先升后降的雙向變化。但是其他 T細胞群，如 CD4+CD25+Foxp3-細胞比例、CD4+Foxp3+CD25-細胞比例，各組間比較無明顯差異。CD11c+IA/IE+CD86+細胞比例、CD11c+IA/IE+CD80+細胞比例以及CD4/CD8比例，各組間比較無明顯差異；③小鼠嚴

7、重過敏反應發(fā)生率在地塞米松預處理組是12.5%，單純囊液致敏組是37.5%。與單純囊液致敏組相比，地塞米松預處理組小鼠肺組織及BALF中炎性細胞降低、組胺表達水平減少、IgE水平降低、血清IL-13水平降低（P＜0.001）。血清IL-10及TGF-β1水平與CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+細胞比例變化趨勢相同，均在單純囊液致敏組下降，在地塞米松預處理組增加。
　　結論：⑴全面的小鼠過敏評價體系優(yōu)化了囊型包蟲病所致

8、過敏反應小鼠動物模型，為探討包蟲病所致過敏反應中免疫耐受機制奠定基礎；⑵以Treg細胞為核心的“免疫耐受調節(jié)網絡”維持了包蟲感染后的免疫耐受狀態(tài)，細粒棘球蚴囊液致敏后，網絡失衡，誘發(fā)過敏反應；⑶包蟲感染后以Treg細胞為核心的“免疫耐受調節(jié)網絡”通過CD25、Foxp3高表達，IL-10、TGF-β1高分泌水平，維持免疫耐受功能。囊液致敏后，免疫耐受狀態(tài)發(fā)生轉變，Treg細胞比例下降，IL-10、TGF-β1水平降低，IL-17A、IL