中藥復方錫類散促粘膜潰瘍愈合作用機制及有效部位群研究.pdf

1、錫類散原載清·尤在涇《金匱翼》,由青黛、珍珠粉、象牙屑、壁錢炭、牛黃、人指甲和冰片組成,具清火解毒、活血止痛、托毒排膿、祛腐生肌之功效,主治咽喉紅腫、糜爛、唇舌腫痛等癥?，F(xiàn)代臨床常用于潰瘍性結腸炎、口腔潰瘍和其它潰瘍等。到目前為止,有關錫類散現(xiàn)代藥理及有效部位群研究很少。本研究主要擬從細胞水平研究錫類散促潰瘍愈合的作用機制及其主要的有效部位群。主要研究內容及結果如下:
　　 1.錫類散體外抑菌、鎮(zhèn)痛和抗炎試驗。
　　 ①

2、采用紙片法和試管二倍稀釋法測定了錫類散體外抑菌效果,結果表明:錫類散體外對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和銅綠假胞菌的最小殺菌濃度(MBC)為12.5m g/mL,對大腸埃希菌的最小殺菌濃度(MBC)為25mg/mL。
　　 ②采用小鼠熱板法和醋酸扭體法測定了錫類散鎮(zhèn)痛效果,結果表明:錫類散具有抗炎性鎮(zhèn)痛作用。
　　 ③采用二甲苯誘導的小鼠耳腫脹、角叉菜膠誘導的小鼠足腫脹和棉球誘導的慢性肉芽腫試驗測定了錫類散抗炎效果,結果表

3、明:錫類散對急性、亞急性和慢性炎癥都有很好的抑制作用。
　　 2.采用組織塊法建立了小鼠口腔成纖維細胞原代培養(yǎng)體系。結果表明:
　　 ①接種5天后,組織塊邊緣開始長出細胞,細胞呈多邊形；培養(yǎng)20天后,80％瓶底長滿細胞,呈長紡錘狀,可傳代。
　　 ②采用MTT法檢測不同代數(shù)的細胞活力,證明在第六代以內,細胞仍可保持較高的增殖活力,確定本試驗所用細胞為第3—4代細胞。
　　 ③確定最佳接種濃度(96孔板,×

4、200μL):對于促增殖藥的最佳接種濃度為2×104,對于抑制細胞生長的最佳接種濃度為4×104。
　　 3.考察了錫類散對成纖維細胞增殖、膠原合成、基質金屬蛋白酶-2,9(MMP-2,9)和組織金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的影響。結果表明:
　　 ①錫類散水提物可顯著(P<0.05)促進成纖維細胞增殖和膠原合成,但其醇提物未達到顯著性水平。確定錫類散水提物和醇提物的最低有效濃度為125μ g/mL。
　

5、　 ②錫類散水提物(125μ g/mL)和錫類散醇提物(125μ g/mL)可顯著(P<0.05)提高MMP-2活性,但對MMP-9活性基本上無影響。
　　 ③錫類散水提物(125μ g/mL)和錫類散醇提物(125μ g/mL)都極顯著(P<0.01)增加TIMP-1合成。
　　 4.測定了錫類散提取物體外還原力及對H2O2誘導損傷的成纖維細胞的SOD、MDA和NO的影響。結果表明:
　　 ①錫類散水提物和醇

6、提物本身都有較好的還原力,1000μ g/mL錫類散水提物的還原力略高于40μ g/mL的維生素C。
　　 ②確定了在H2O2誘導的成纖維細胞損傷模型中,H2O2誘導濃度為100μ g/mL,誘導時間16小時。
　　 ③錫類散水提物(125μ g/mL)和醇提物(125μ g/mL)都能顯著提高SOD活性；可極顯著(P<0.01)降低過氧化氫損傷的成纖維細胞的丙二醛釋放量；可使細胞NO釋放量極顯著(P<0.01)增加。<

7、br>　　 5.考察了錫類散各單味藥不同分離部位對成纖維細胞增殖、膠原合成、基質金屬蛋白酶-2,9和金屬蛋白酶抑制因子-1的影響。初步確定了錫類散七個單味藥促成纖維細胞增殖及膠原合成的主要有效部位。試驗結果表明:
　　 ①在錫類散七個單味藥不同分離部位中,促成纖維細胞增殖和膠原合成的主要部位有:青黛水提物；珍珠粉大于14KD的組分；象牙屑小于14KD的組分以及人指甲水提物和醇提物。
　　 ②在錫類散七個單味藥不同分離部

8、位中,抑制成纖維細胞增殖和膠原合成的主要部位有:青黛醇提物；牛黃:冰片和壁錢炭醇提物。
　　 6.測定了錫類散七個單味藥不同分離部位體外還原力及對H2O2誘導損傷的成纖維細胞SOD、MDA和NO的影響。試驗結果表明:青黛水提物,人指甲水提物和醇提物有很好的抗氧化作用。
　　 本研究結果顯示,錫類散促潰瘍愈合的作用機制與其促成纖維細胞增殖、膠原合成、MMP-2、TIMP-1以及抗氧化密切有關。在其各單味藥不同提取部位中,能

9、促進成纖維細胞增殖、膠原合成、MMP-2和TIMP-1的主要部位有青黛水提物、象牙屑水提物小分子部位、珍珠粉水提物大分子部位以及人指甲水提物和醇提物。青黛醇提物、牛黃和冰片對纖維細胞增殖、膠原合成有抑制作用,但根據(jù)相關文獻推測這幾味藥或部位應與抗炎密切相關,同樣是潰瘍愈合不可缺少的。壁錢炭在本研究中的結果是抑制成纖維細胞增殖和膠原合成,不利于潰瘍愈合,對于壁錢炭是否具有其它的與潰瘍愈合相關的作用,由于無文獻可查,目前不能確定,有待進一步