TLR4、IL-23及IL-17A在原發(fā)性肝癌中的作用.pdf

1、目的：本課題以肝癌細(xì)胞株HepG2和原發(fā)性肝癌臨床病理組織標(biāo)本為研究對(duì)象，觀察TLR4(Toll-like receptor4，TLR4)介導(dǎo)的信號(hào)通路對(duì)原發(fā)性肝癌中IL-23(interleukin-23，IL-23)和IL-17A表達(dá)的影響，分析TLR4、IL-23及IL-17A與原發(fā)性肝癌臨床病理特征的關(guān)系，揭示TLR4可經(jīng)由IL-23/IL-17A炎癥軸在原發(fā)性肝癌的發(fā)生和發(fā)展中起作用，為原發(fā)性肝癌的臨床免疫治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依

2、據(jù)。
　　方法：（1）應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)TLR4的激活劑LPS(Lipopolysaccharides，LPS)與髓樣分化因子-88(Myeloid differentiation factor88，MyD88)的阻斷劑ST2825對(duì)HepG2細(xì)胞增殖活性的影響。（2）運(yùn)用ELISA法檢測(cè)LPS和ST2825對(duì)HepG2細(xì)胞分泌IL-23與VEGF的影響。（3）用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)HepG2細(xì)胞TLR4、IL-23、IL-1

3、7A、IL-6、及NF-κB mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。（4）采用Western-blot法測(cè)定HepG2細(xì)胞TLR4、IL-23及IL-17A蛋白的表達(dá)。（5）收集寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院臨床上未經(jīng)化療和放療的肝癌癌標(biāo)本45例，行臨床病理組織分型和臨床分期，同時(shí)取遠(yuǎn)端癌旁正常組織20例（均證實(shí)無癌細(xì)胞）為正常對(duì)照，行常規(guī)石蠟包埋、切片，免疫組化法檢測(cè)肝癌組織和遠(yuǎn)端癌旁組織TLR4、IL-23和IL-17A的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系。
　　結(jié)

4、果：（1）CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示，與細(xì)胞對(duì)照組相比較，選用的1mg/l LPS培養(yǎng)24h對(duì)HepG2細(xì)胞無毒且能促進(jìn)細(xì)胞增殖，選用ST282540μmol/l的濃度培養(yǎng)8h對(duì)HepG2無毒且則抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。（2）LPS促進(jìn)了HepG2細(xì)胞的IL-23與VEGF的表達(dá)量，隨時(shí)間的增長(zhǎng)表達(dá)水平升高，阻斷MyD88后其表達(dá)水平下降。（3）LPS促進(jìn)HepG2細(xì)胞株TLR4、IL-23、IL-17A、IL-6、NF-κB mRNA的轉(zhuǎn)錄；阻斷

5、MyD88后則IL-23、IL-17A、IL-6、NF-κB mRNA的轉(zhuǎn)錄下降。（4）LPS促進(jìn)HepG2細(xì)胞株TLR4、IL-23、IL-17A的蛋白表達(dá)，阻斷MyD88后IL-23和IL-17A蛋白表達(dá)則降低。（5）免疫組化結(jié)果顯示，肝癌組織和癌旁正常組織中均有TLR4、IL-23及IL-17A的表達(dá)，但TLR4、IL-23及IL-17A在肝癌組織的蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于遠(yuǎn)端癌旁的正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；45