IL-23在大鼠脊髓損傷中的表達(dá).pdf

1、目的：
　　研究IL-23在正常大鼠脊髓和損傷后不同時(shí)間段脊髓組織中的表達(dá)格局，并鑒定其細(xì)胞表達(dá)定位。
　　方法：
　　1.使用紐約大學(xué)脊髓損傷儀以10g×25mm的標(biāo)準(zhǔn)制備中等程度的SD大鼠脊髓損傷模型。
　　2.用Trizol提取總RNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)脊髓損傷前后各組大鼠脊髓組織中IL-23 mRNA的表達(dá)。
　　3.單去污裂解液提取組織蛋白，通過(guò)Western blot

2、檢測(cè)脊髓損傷前后各組脊髓組織中IL-23蛋白的表達(dá)。
　　4.取各組脊髓標(biāo)本進(jìn)行冰凍切片，通過(guò)免疫熒光檢測(cè)脊髓損傷前后各組大鼠脊髓組織中IL-23的表達(dá)。
　　5.使用IL-23/CD3， IL-23/CD68和IL-23/GFAP雙標(biāo)記免疫熒光染色法檢測(cè)IL-23在脊髓損傷前后各組脊髓組織中不同類(lèi)型神經(jīng)細(xì)胞和免疫細(xì)胞上的表達(dá)和定位。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立中等程度撞擊傷的SD大鼠脊髓損傷模型。
　　

3、2. RT-PCR結(jié)果顯示，正常對(duì)照組IL-23mRNA的表達(dá)為0.34±0.02，大鼠脊髓損傷后第1、3、7、14和21天， IL-23mRNA的表達(dá)分別為0.65±0.02、0.67±0.02、0.71±0.04、0.84±0.10和0.95±0.05。脊髓損傷各組中IL-23mRNA的表達(dá)均明顯高于正常對(duì)照組，具有顯著性差異（P<0.05），并隨著損傷后時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)逐漸增多，3周達(dá)到高峰。
　　3. Western bl

4、ot結(jié)果顯示，正常對(duì)照組IL-23蛋白表達(dá)為0.65±0.05，脊髓損傷后第1、3、7、14和21天， IL-23蛋白表達(dá)分別為0.76±0.05、0.81±0.03、0.89±0.04、0.94±0.06和0.99±0.05。脊髓損傷各組中IL-23蛋白的表達(dá)均高于正常對(duì)照組，具有顯著性差異（P<0.05），并隨著損傷后時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)逐漸增多，3周達(dá)到高峰。
　　4.免疫熒光結(jié)果顯示正常SD大鼠脊髓未發(fā)現(xiàn)IL-23的表達(dá)，脊髓

5、損傷后第1、3、7、14和21天， IL-23+細(xì)胞分別為11±3、45±5、49±4、75±5和22±3個(gè)/mm2。脊髓損傷后第1、3、7、14和21天，IL-23+細(xì)胞率分別為5.33±1.22％、12.91±1.20%、19.31±0.99%、19.34±0.90%和6.14±0.59%。脊髓損傷后各組IL-23+細(xì)胞數(shù)和IL-23+細(xì)胞率較正常對(duì)照組均明顯增多，具有顯著性差異（P<0.05），從損傷后一天至兩周表達(dá)逐漸增加，兩周

6、后開(kāi)始下降。
　　5.免疫熒光雙染色結(jié)果顯示，正常SD大鼠脊髓檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)CD3+細(xì)胞，在脊髓損傷后第1天在損傷局部開(kāi)始檢測(cè)到CD3+細(xì)胞，第3天達(dá)到第一次高峰，第7天有所下降，第14天達(dá)到第二次高峰。脊髓損傷后第1、3、7、14和21天， CD3+細(xì)胞比例分別為16.75±0.84%、25.19±0.83%、7.11±0.26%、32.56±0.95%、9.63±0.95%。更重要的是，這些CD3+細(xì)胞絕大部分表達(dá)IL-23，脊髓

7、損傷后第1、3、7、14和21天，IL-23+CD3+/CD3+比例分別為78.13±4.63%、78.44±2.41%、73.62±12.01%、75.38±5.86%、78.99±15.91%。
　　6.正常SD大鼠脊髓和脊髓損傷后第1、3、7、14和21天，CD68+細(xì)胞比例分別為2.38±0.35%,10.45±0.72%、12.24±0.88%、11.61±0.52%、8.13±0.31%、5.36±0.81%；CD68

8、+細(xì)胞在損傷后第一天開(kāi)始增多，第三天達(dá)到高峰后緩慢下降。這些脊髓損傷后第1、3、7、14和21天，IL-23+CD68+/CD68+比例分別為83.58±7.48%,86.22±3.28%,99.17±4.19%,70.99±2.70%和58.7±19.61%
　　7.正常對(duì)照組大鼠脊髓未檢測(cè)到IL-23在GFAP+細(xì)胞的表達(dá)，而脊髓損傷后第1、3、7、14和21天IL-23+GFAP+/GFAP+百分比分別為52.82±15.4

9、0%、87.97±8.65%、72.92±8.79%、80.19±5.72%和88.95±4.86%，與正常對(duì)照組比較均明顯增加，具有顯著性差異見(jiàn)（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.脊髓損傷各組脊髓組織中IL-23mRNA和IL-23蛋白含量較正常對(duì)照組均明顯增加，從損傷后一天至三周表達(dá)逐漸增多。
　　2.組織免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)脊髓損傷各組脊髓組織中IL-23+細(xì)胞和IL-23+細(xì)胞率較正常對(duì)照組均明顯增加，從損傷后