表達小鼠重組IL-23基因的小鼠乳腺癌細胞系MA891-IL-23的建立.pdf

1、目的：腫瘤是嚴重影響人類健康的疾病，腫瘤的形成和發(fā)展與宿主免疫監(jiān)視功能的異常及腫瘤細胞免疫逃逸作用密切相關。乳腺癌是一種嚴重危害婦女健康的惡性腫瘤，在發(fā)達國家及我國的一些大型工業(yè)化城市，乳腺癌的發(fā)病率已居婦女惡性腫瘤的首位。目前，手術、化療和放療仍是乳腺癌的主要治療方法，但是都存在著一定的局限性。通過目前常用方法治療后，乳腺癌患者的五年生存率仍不理想；因此，探討新的治療方法和措施刻不容緩。近年來，腫瘤的基因治療和免疫生物治療發(fā)展迅速，將

2、可能成為腫瘤治療的新亮點。腫瘤的免疫治療不僅能提高宿主的免疫能力，特異性殺傷腫瘤細胞，而且對正常組織細胞有較少的毒副作用。白細胞介素23(IL-23)是2000年發(fā)現的一種異二聚體細胞因子，可促進記憶性T細胞增殖，誘導活化的T細胞和樹突狀細胞產生干擾素-γ(IFN-γ)等細胞因子，具有較強的免疫調節(jié)活性，參與自身免疫性疾病、慢性炎癥反應和某些感染性疾病的發(fā)病和調控。有報道提出，IL-23可通過誘導和增強小鼠脾細胞CTL活性和IFN-γ等

3、細胞因子的產生而發(fā)揮抗腫瘤作用。因此，IL-23作為腫瘤基因治療的候選因子越來越受到關注。然而，IL-23抗腫瘤作用的具體機制還不十分清楚。本研究利用逆轉錄病毒載體，將鼠源IL-23基因轉入小鼠乳腺癌細胞株MA-891，研究了IL-23基因對乳腺癌細胞MA-891體外生長及生物學性狀的影響，為乳腺癌的基因治療研究提供實驗依據。 方法： 1.IL-23基因轉染細胞的構建：將攜帶mIL-23基因的逆轉錄病毒載體(LXSN/I

4、L-23)，經過ψ2和PA317包裝細胞包裝成含IL-23基因的逆轉錄病毒，利用該病毒將mIL-23基因導入MA 891細胞，經G418篩選后獲得表達miL-23的陽性細胞克隆MA891/IL-23。 2.MA891/IL-23細胞生物學形狀分析用RT-PCR法檢測MA891/IL-23細胞IL-23基因的表達；用細胞免疫組化法檢測MA891/IL-23細胞中IL-23蛋白的表達；用ELISA法檢測MA891/IL-23細胞分

5、泌raiL/23及raiL-23誘導小鼠脾細胞產生IFN-γ的情況；用MTT比色法檢測腫瘤細胞的體外增殖；流式細胞儀檢測細胞周期以及細胞表面分子CD80、CD86、MHCⅠ、 MHCⅡ、Fas的表達。 結論：IL-23基因導入 MA891 細胞后，構建的MA891/IL-23細胞能夠分泌IL-23，對細胞的形態(tài)學和增殖反應無明顯影響；MA891/IL-23細胞表達CD80、CD86、MHCⅠ、MHC Ⅱ、Fas的水平無顯著性差