三株藍細菌菌株胞外多糖研究和菌種鑒定.pdf

1、三株從海水中分離的藍細菌菌株A104、A109、A115在其生長過程中可以向周圍培養(yǎng)基中分泌大量粘性多糖類物質，采用單次單因子方法對培養(yǎng)基組成(不同NaCl濃度、不同MgS04濃度)和培養(yǎng)條件(溫度、光照強度)進行優(yōu)化研究，最終得到這三株菌生產胞外多糖類物質的最佳培養(yǎng)基成分和最佳培養(yǎng)條件：A104：60gL<'-1>NaCl，0.6gL<'-1>MgSO4，A109：40gL<'-1>NaCI，0.7gL<'-1>MgSO4，Al15：

2、30gl<'-1>NaCL,0.8gL<'-1>MgSO4.最適培養(yǎng)條件：均為28℃，光照強度分別為3600，2700，3600 Lux。A104、A109、A115胞外多糖產量在上述條件下分別在第12天，9天和1l天達到8.57 gL<'-1>，7.53 gL<'-1>和6.98gl<'-1>。 因為這三株菌所產胞外多糖均為水溶性多糖，因此采用了乙醇沉淀的方法從培養(yǎng)物上清中沉淀出多糖類物質，并使用Sevag方法去除多糖沉淀中

3、的蛋白質，使用紫外掃描方法檢測蛋白質是否除盡，除凈蛋白質的多糖粗品使用透析方法去除小分子雜質，通過分子篩層析(SeptldexG-100，SeptldexG-75)方法進一步純化，發(fā)現(xiàn)這三株菌所產胞外多糖為分子量均一的單一多糖。通過分子篩層析(Sepharose 4B)測定它們的分子量分別為：25kD，38kD和46kD。通過硫酸基團含量測定，糖醛酸含量測定，未發(fā)現(xiàn)這三種胞外多糖中有這兩種基團存在。通過薄層層析(TLc)分析它們的單糖組

4、成，三種多糖均只含有葡萄糖一種單糖組分。 采用形態(tài)觀察和16SrRNA基因序列分析相結合的方法對這三株菌進行了菌種鑒定，發(fā)現(xiàn)，從形態(tài)學角度出發(fā)，這三株菌的形態(tài)、大小、分裂方式與伯杰氏手冊中對Cyanothece的形態(tài)描述一致。從16SrRNA基因序列分析方法出發(fā)，這三株菌的16SrRNA基因序列與列與Dactylococcopsis標準菌株Dacfylococcopsissp．PCCC8305的16SrRNA基因序列相似度分別