低溫誘導淡水白鯧尾鰭細胞CBT凋亡的研究.pdf

1、淡水白鯧屬于喜溫性魚類，水溫降至10℃時就出現寒害死亡。本實驗室在1997年建立了淡水白鯧尾鰭細胞系CBT，發(fā)現該細胞系具有與整體相一致的溫度生長特性——10℃脅迫致死，這為探討喜溫性魚類細胞的寒害機理提供了一個較為理想的研究模型。 本實驗以CBT細胞為研究對象，探討了10℃低溫導致淡水白鯧尾鰭細胞系CBT死亡的原因及其可能機制。實驗采用CCK-8試劑盒法檢測了低溫處理前后的細胞存活率；用熒光染料H2DCFDA染色測定細胞內活性

2、氧(ROS)含量的變化；通過亞二倍體峰和Tunel分析檢測細胞凋亡，并用瓊脂糖凝膠電泳法對死亡細胞的DNA進行了分析；用Hoechst33258染色觀察凋亡細胞核形態(tài)變化；比色法測定乳酸脫氫酶(LDH)釋放率。實驗結果表明，隨著CBT細胞受10℃低溫作用時間延長，細胞存活率顯著下降，細胞內ROS含量和LDH釋放率顯著增加(P＜0.01)。低溫處理3d的CBT細胞經流式細胞儀檢測出現亞二倍體峰，凋亡率為13％。再經32℃復溫12h后，瓊脂

3、糖凝膠電泳顯示DNA凋亡梯帶；Tunel檢測，低溫處理3d、4d和5d的CBT細胞分別有23.49％，27.72％和35.10％發(fā)生凋亡。低溫處理5d的CBT細胞核分裂成多個小核，呈現出典型的凋亡小體的形狀。維生素E濃度梯度顯示，維生素E對低溫處理的CBT細胞有明顯的保護作用，能明顯改善細胞活力和LDH的釋放現象，且在50μM至1000μM濃度范圍內，該保護作用呈劑量依賴性。由此認為，10℃低溫能誘導CBT細胞凋亡。ROS參與了10℃低