白藜蘆醇誘導人T淋巴瘤Jurkat細胞凋亡.pdf

1、目的： 1．確定白藜蘆醇(resveratrol，Res)是否可以誘導人T淋巴瘤Jurkat細胞進入凋亡；描述該細胞凋亡具體情況，包括細胞膜、細胞核、染色體、凋亡小體、空泡以及細胞器等的變化。 2．定量檢測并分析該細胞凋亡時對藥物的時間和劑量依賴情況，以及增殖活性、細胞周期變化情況等；3．初步探索該細胞系凋亡機理，了解相關基因(β-actin、bax、caspase-3、bcl-2、BCL-XL、AIF等)的表達以及對凋

2、亡的調(diào)控情況，探索該細胞系在該藥物誘導下的凋亡通路。 方法： 本實驗通過Jurkat細胞培養(yǎng)，按預設方案添加Res處理細胞樣品；主要通過核酸電泳檢測DNA變化情況，并初步推斷細胞凋亡時間；運用熒光顯微鏡技術，Wright-Giemsa染色以及電子顯微鏡來檢測并分析凋亡的形態(tài)變化、事件發(fā)生時間等；運用流式細胞技術、MTT法定量檢測并分析該細胞對藥物的時間、劑量依賴性及增殖活性、細胞周期變化等；運用蛋白印跡技術(Wester

3、n blotting)檢測凋亡的相關因子的表達變化及可能的凋亡路徑。 結果： 1．Res誘導人T淋巴瘤Jurkat細胞凋亡，顯示典型的凋亡特征，包括：DNA Ladder?，F(xiàn)象；染色質(zhì)高度凝聚形成致密質(zhì)塊，凝聚的染色質(zhì)出現(xiàn)邊聚化現(xiàn)象；胞漿濃縮而出現(xiàn)空泡結構；線粒體膨大、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張但結構均完整；核膜凹陷然后逐漸破裂；細胞形成若干個仍由質(zhì)膜包裹凋亡小體；等。 2．Res誘導人T淋巴瘤Jurkat細胞凋亡，在一定范圍內(nèi)

4、呈現(xiàn)劑量和時間依賴性，且Res可以阻滯該細胞系于GO/G1期，使細胞分裂、增殖進度受抑。 3．研究發(fā)現(xiàn)，Res誘導人T淋巴瘤Jurkat細胞12h時，細胞已進入凋亡途徑，24h時已有相當數(shù)量的Juekat細胞進入凋亡后期，經(jīng)過48h時絕大多數(shù)細胞進入凋亡后期，也就是說Res誘導Jurkat細胞系凋亡的時間依賴性在48h以內(nèi)，以后隨時間延長抑制效果會逐漸減弱。 4．研究發(fā)現(xiàn)，0.2mmol/L的Res濃度在24h內(nèi)可以使初