高仿真殼聚糖神經(jīng)支架的制備及其橋接神經(jīng)缺損的實驗研究.pdf

1、周圍神經(jīng)缺損是平時與戰(zhàn)時最常見的創(chuàng)傷類型之一，常導致患者感覺和運動功能喪失，是目前尚未解決的臨床難題之一。自體神經(jīng)移植是治療周圍神經(jīng)缺損的金標準，主要優(yōu)勢是其修復效果明確，但供體來源有限、供區(qū)功能損害以及供體和受體神經(jīng)尺寸和類型不匹配等原因限制了自體神經(jīng)移植的應用。組織工程學的發(fā)展為神經(jīng)缺損的治療帶來了希望。目前已經(jīng)有各種超微結(jié)構的神經(jīng)支架被相繼開發(fā)，并被嘗試應用于神經(jīng)缺損的治療之中，但可惜的是其在體修復效果均不甚理想，主要的原因之一是

2、神經(jīng)支架的內(nèi)部結(jié)構與正常神經(jīng)的超微結(jié)構相差較大。目前國際公認的最理想的神經(jīng)支架應該具有與正常神經(jīng)基底膜高度仿真的軸向微管樣結(jié)構。鑒于此，本研究以殼聚糖為主要原料，通過前期已獲國家發(fā)明專利的梯度冷淋技術，成功構建了高仿真神經(jīng)支架，并在大鼠坐骨神經(jīng)缺損模型中，從形態(tài)學和功能學兩方面將高仿真支架與自體神經(jīng)移植進行對比，綜合評估其修復效果。全文共分為三部分：
　　第一部分：高仿真殼聚糖支架材料的制備
　　目的：構建在超微結(jié)構上與正常

3、神經(jīng)基底膜結(jié)構高度仿真的組織工程神經(jīng)支架。
　　方法：以殼聚糖為原料，應用改良的梯度冷淋技術制備高仿真神經(jīng)支架，掃描電鏡觀察其內(nèi)部結(jié)構。
　　結(jié)果：本實驗制備的殼聚糖神經(jīng)支架在縱截面上為相互平行的微管樣結(jié)構，微管相對均一，管徑為54.26±12.1μm（范圍：45～75μm）；神經(jīng)支架的橫截面類似于蜂窩樣結(jié)構。
　　結(jié)論：利用前期開發(fā)的梯度冷淋技術制備的神經(jīng)支架的超微結(jié)構高度仿真于正常神經(jīng)的基底膜結(jié)構，有望成為神經(jīng)缺損

4、修復中自體神經(jīng)的替代物。
　　第二部分：高仿真殼聚糖支架的基本性能測定
　　目的：對殼聚糖支架的性能進行優(yōu)化和改進，并測定殼聚糖支架的相關特征和參數(shù)。
　　方法：測定殼聚糖支架的孔隙率、表觀密度，在此基礎上利用京尼平（genipin）對殼聚糖支架進行交聯(lián)，確定殼聚糖材料的交聯(lián)度與交聯(lián)時間以及交聯(lián)劑濃度的關系，同時評價交聯(lián)后殼聚糖材料的細胞相容性，對比殼聚糖支架交聯(lián)前后的降解性以及力學性能，以全面了解高仿真殼聚糖神經(jīng)支架

5、的基本性能。
　　結(jié)果：殼聚糖神經(jīng)支架的孔隙率為85.13±2.89％，表觀密度為0.0623±0.0242mg/mm3；應用京尼平交聯(lián)殼聚糖材料，材料的交聯(lián)度隨交聯(lián)時間延長而增加，隨交聯(lián)劑濃度增大而增加。此外，殼聚糖支架經(jīng)京尼平交聯(lián)后，降解性以及力學強度有了明顯改善，同時交聯(lián)后的材料具有良好的細胞相容性，可以滿足在體修復神經(jīng)缺損的要求。
　　結(jié)論：殼聚糖支架經(jīng)京尼平交聯(lián)后，可以滿足在體移植的要求。
　　第三部分：殼聚

6、糖支架修復坐骨神經(jīng)缺損的有效性評價
　　目的：評價高仿真殼聚糖支架在體橋接大鼠15mm坐骨神經(jīng)缺損的修復效果。
　　方法：以前期制備的高仿真神經(jīng)支架修復大鼠15mm坐骨神經(jīng)缺損，應用形態(tài)計量學、逆行示蹤、神經(jīng)電生理以及行為學檢測評價該高仿真支架的修復效果。
　　結(jié)果：本實驗構建的殼聚糖支架具有軸向平行排列的微管樣超微結(jié)構，該結(jié)構高度仿真于正常神經(jīng)基底膜結(jié)構。在橋接大鼠15mm坐骨神經(jīng)缺損的實驗中，該仿真支架可取得與自體