LMNA基因復(fù)雜突變引起家族性房室傳導(dǎo)阻滯伴擴(kuò)心病機(jī)制研究.pdf

1、目的：房室傳導(dǎo)阻滯（atrioventricular block，AVB）是指在心臟電激動(dòng)傳導(dǎo)過程中，由于心房和心室之間的電傳導(dǎo)異常而導(dǎo)致的心律失常。根據(jù)傳導(dǎo)阻滯的嚴(yán)重程度可分為Ⅰ度、Ⅱ度和Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯，隨著分子生物學(xué)和遺傳學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)AVB具有一定的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素，并確定了多個(gè)致病基因。前期工作中，我們?cè)谂R床中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)遺傳性Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯伴擴(kuò)張型心肌?。╠ilated cardiomyopathy，DCM）家系，本次研究主

2、要對(duì)其進(jìn)行致病基因鑒定與機(jī)制研究。
　　方法：首先，采用候選基因測(cè)序?qū)σ呀?jīng)確診為AVB的患者進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)已發(fā)現(xiàn)的AVB及DCM致病基因TRPM4，SCN5A，SCN1B，NKX2.5，CLCA2，LMNA進(jìn)行測(cè)序并確定；其次，構(gòu)建致病基因的野生型和突變型真核表達(dá)體系，將野生型和突變型質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人宮頸癌細(xì)胞系（Hela），激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)野生和突變型蛋白在細(xì)胞定位和蛋白表達(dá)情況，利用Western-blot檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)情況

3、并對(duì)該突變功能進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：遺傳學(xué)分析及測(cè)序結(jié)果顯示，在家系患者中LMNA基因第10號(hào)外顯子存在缺失，并且第九號(hào)內(nèi)含子靠近十號(hào)外顯子處發(fā)生了部分堿基的缺失，這是一種新的復(fù)雜突變形式，并且與疾病共分離；Western-blot結(jié)果顯示突變型lamin蛋白表達(dá)水平異常，激光共聚焦亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示突變型蛋白位置異常：正常野生型lamin僅在細(xì)胞核纖層表達(dá)，而突變型蛋白在細(xì)胞核纖層及核內(nèi)均有表達(dá)且細(xì)胞核結(jié)構(gòu)異常；LMNA基因表達(dá)

4、異?？梢鸱渴医Y(jié)細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡或纖維化，導(dǎo)致房室傳導(dǎo)速率降低，并發(fā)生房室傳導(dǎo)阻滯，應(yīng)用Western-blot檢測(cè)自噬的標(biāo)志蛋白LC3-II后，結(jié)果顯示此LMNA突變形式不影響LC3-II蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：本次研究中，我們發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的LMNA基因復(fù)雜突變類型，該變異可使其編碼的蛋白表達(dá)和定位異常并導(dǎo)致細(xì)胞核核纖層結(jié)構(gòu)異常，最終導(dǎo)致遺傳性房室傳導(dǎo)阻滯伴擴(kuò)張型心肌病的發(fā)生。核纖層在細(xì)胞分裂中呈現(xiàn)周期性的變化，因此核纖層的異常