低血糖對缺氧心肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細胞凋亡的作用和機制研究.pdf

1、目的：通過建立離體大鼠心肌細胞缺氧模型，觀察低血糖水平對缺氧心肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白（GRP78/BIP）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激感受蛋白（PERK、ATF-6、IRE-1）及凋亡信號分子（CHOP、Caspase-12）表達的影響，確定低血糖對缺氧心肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細胞凋亡的可能機制、作用靶點和信號通路，為進一步探索缺氧狀態(tài)下促進心肌細胞凋亡的危險因素及降低心肌細胞凋亡率提供新論點、新方向。
　　方法：以大鼠H9C2心肌細胞系D26

2、-D29（第26-29代）作為實驗細胞，通過調(diào)節(jié)葡萄糖培養(yǎng)基濃度模擬人體血糖濃度，并于缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)以建立心肌細胞缺氧模型，依據(jù)隨機原則將細胞分為4組，分別為：正常血糖不缺氧組（SN組）：18mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、正常培養(yǎng)；正常血糖缺氧組（MN組）：18mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、缺氧培養(yǎng)；低血糖不缺氧組（SL組）：3mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、正常培養(yǎng)；低血糖缺氧組（ML組）：3mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、缺氧培養(yǎng)。通過采用Weste

3、rn Blot法和Real-time PCR法檢測各組H9C2大鼠心肌細胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白（GRP78/BIP）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激感受蛋白（PERK、ATF-6、IRE-1）和凋亡信號分子（CHOP、Caspase-12）的表達情況，從而探討心肌細胞在缺氧狀態(tài)下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在細胞凋亡中所呈現(xiàn)的變化規(guī)律，以及低血糖對缺氧心肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的心肌細胞凋亡的作用機制和途徑。
　　結(jié)果：1、低血糖不缺氧組GRP78/BIP、PERK、AT

4、F-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達高于正常血糖不缺氧組，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；2、正常血糖缺氧組GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達高于正常血糖不缺氧組，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；3、低血糖缺氧組GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達高于正常血糖缺氧組，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P

5、<0.05)；4、在基因表達方面，低血糖缺氧組 GRP78/BIP mRNA、PERK mRNA、ATF-6 mRNA、IRE-1mRNA、CHOP mRNA及Caspase-12 mRNA的表達均高于正常血糖缺氧組，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，這與該組上述6種目的蛋白的表達趨勢是一致的。
　　結(jié)論：本研究通過建立H9C2大鼠心肌細胞缺氧模型，證實了心肌細胞缺氧后存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其誘導(dǎo)的相關(guān)凋亡通路；而低血糖加重了缺氧心肌