缺氧-復(fù)氧損傷和離糖濃度對(duì)心肌細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用研究.pdf

1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在細(xì)胞內(nèi)具有重要的生理功能,包括負(fù)責(zé)正確折疊蛋白質(zhì)的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、信號(hào)肽識(shí)別和糖基化修飾。然而當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)攝取、釋放Ca2+紊亂或者蛋白質(zhì)的加工運(yùn)輸障礙時(shí),會(huì)引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)(endoplasmic reticulum stress,ERS)。研究發(fā)現(xiàn)ERS參與了很多疾病的發(fā)生,如糖尿病、肥胖和腫瘤等,同時(shí)還介導(dǎo)心臟缺血／再灌注(ischemic／reperfusion,I／R)損傷。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulat

2、ed protein78kD,GRP78)是應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)預(yù)留蛋白,被認(rèn)為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的中心調(diào)節(jié)劑,也是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志蛋白,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中具有保護(hù)細(xì)胞DNA免受損傷的作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子GRP78在蛋白表達(dá)水平的變化,以及細(xì)胞活性和形態(tài)學(xué)的改變,來(lái)探討缺氧／復(fù)氧損傷和高糖濃度對(duì)心肌細(xì)胞所引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用。
　　 目的:觀察大鼠心肌細(xì)胞缺氧／復(fù)氧和高糖濃度時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白表達(dá)以及細(xì)胞活性的改變及其意義

3、,以探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)與心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷和糖濃度變化的關(guān)系。
　　 方法:原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞,缺氧6h后復(fù)氧0h、12h制備缺氧復(fù)氧損傷模型,使用葡萄糖濃度為25mmol／L的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h制備高糖損傷模型,1mg／L衣霉素孵育心肌細(xì)胞作為本實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照,使用相差倒置顯微鏡觀察心肌細(xì)胞搏動(dòng)狀況,HE染色觀察心肌細(xì)胞形態(tài)變化,并用Western blot法檢測(cè)GRP78表達(dá)水平,并檢測(cè)細(xì)胞活性。
　　 結(jié)果:缺