MRI信號(hào)比值與神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：隨著MRI成為目前脊柱脊髓病變最有價(jià)值的檢查以來，許多學(xué)者和臨床工作者通過對MRI信號(hào)變化與患者臨床癥狀相比較，對MRI信號(hào)判斷預(yù)后等問題進(jìn)行了大量研究，得出的結(jié)論不一。同時(shí)對于MRI信號(hào)產(chǎn)生的機(jī)制，特別對于MRI T2高信號(hào)產(chǎn)生的機(jī)制及其所代表的微觀變化有較多研究，但目前尚無統(tǒng)一定論。目前多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞凋亡在脊髓病變的發(fā)病機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用，但不同強(qiáng)度的MRI T2高信號(hào)與神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度之間是否存在某種關(guān)聯(lián)，目前還

2、無類似問題的探討。本研究旨在通過建立慢性壓迫性脊髓疾病動(dòng)物模型，觀察記錄慢性受壓的頸脊髓MRI信號(hào)的變化，并進(jìn)行相應(yīng)神經(jīng)細(xì)胞凋亡檢測，進(jìn)一步對這兩者之間關(guān)系進(jìn)行探討，從而為脊髓MRI信號(hào)改變產(chǎn)生機(jī)制的深入研究提供新的方向。
　　方法：將試驗(yàn)用，雄性，3個(gè)月月齡新西蘭大白兔32只，隨機(jī)挑選8只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為對照組，余作為實(shí)驗(yàn)組，并給予每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)。術(shù)前將所有白兔進(jìn)行皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)檢查。實(shí)驗(yàn)組按照兔脊髓型頸椎病動(dòng)物

3、模型的要求建立動(dòng)物模型，對照組除不植入自制樹脂脊髓壓迫釘外，其他手術(shù)步驟同實(shí)驗(yàn)組。術(shù)后立即進(jìn)行皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)檢查復(fù)查，未見急性脊髓損傷圖形。術(shù)后三個(gè)月開始每1個(gè)月給予所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行CSEP檢測，采用改良Tarlov's運(yùn)動(dòng)功能評分法進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能評估。術(shù)后6個(gè)月將所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行MRI檢查并計(jì)算MRI T2信號(hào)比值(比值=高信號(hào)強(qiáng)度值/正常信號(hào)強(qiáng)度值，取脊髓受壓信號(hào)增高最明顯部位或脊髓受壓最嚴(yán)重部位為高信號(hào)強(qiáng)度值，取頸7胸1

4、椎體水平脊髓信號(hào)正常部位為正常信號(hào)值)，記錄信號(hào)比值大小。MRJ檢測完畢后將所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死并取受壓迫脊髓部位甲醛固定后行HE巳染色光鏡觀察，Bcl-2和Bax免疫組織化學(xué)染色(結(jié)果判斷：細(xì)胞內(nèi)有棕黃色粗顆粒分布或棕黃色細(xì)膩顆粒彌漫分布者為陽性反應(yīng))。用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0處理數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，方法采用雙變量相關(guān)與回歸分析。
　　結(jié)果：皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組所有白兔隨著脊髓受壓時(shí)間延長，CSEP的波幅以及

5、潛伏期均產(chǎn)生了明顯的變化，其潛伏期P15逐漸延長；對照組未見明顯變化。改良Tarlov's運(yùn)動(dòng)功能評分法進(jìn)行功能評分：實(shí)驗(yàn)組白兔隨著脊髓受壓時(shí)間的延長，Tarlov’s運(yùn)動(dòng)功能評分逐漸降低，與對照組相比有顯著性差異；對照組未見明顯神經(jīng)功能受損癥狀。MRI檢測結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組肉眼可見MRI T2高信號(hào)信號(hào)強(qiáng)度不等，信號(hào)強(qiáng)度比值計(jì)算結(jié)果為：1.01至1.15不等；對照組白兔均未觀察到明顯肉眼高信號(hào)。實(shí)驗(yàn)室檢查：對照組HE染色可見白質(zhì)中軸突排列整

6、齊，膠質(zhì)細(xì)胞規(guī)整，灰質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞飽滿，胞漿豐富；白質(zhì)及灰質(zhì)中見少量Bcl-2和Bax弱陽性細(xì)胞，胞質(zhì)著色成棕黃色，胞核中空。隨著MRI T2信號(hào)比值增加，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)及Bax，Bcl-2表達(dá)量均發(fā)生不同程度的變化。信號(hào)比值較低組(比值為1.01-1.05)HE染色白質(zhì)中可見腫脹的軸突，軸突周圍有部分形成較大的空泡，灰質(zhì)中神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目未見明顯減少，細(xì)胞皺縮，胞質(zhì)豐富，核濃縮；Bax與對照組相比表達(dá)增多，胞質(zhì)棕黃色程度加深；Bcl-2細(xì)

7、胞棕黃色出現(xiàn)向核內(nèi)轉(zhuǎn)染。信號(hào)比值最高組(信號(hào)1.11-1.15)HE染色可見脊髓組織主要結(jié)構(gòu)不清甚至消失，組織明顯水腫、細(xì)胞成分明顯減少。白質(zhì)中軸突纖維排列紊亂，絕大部分神經(jīng)軸突周圍的間隙變大，明顯呈空泡樣改變，灰質(zhì)中可見神經(jīng)元細(xì)胞皺縮明顯，細(xì)胞核固縮，Niss1體消失；Bax表達(dá)最多，棕黃色最明顯；Bcl-2核內(nèi)棕黃色陽性最明顯。中等信號(hào)比值組(1.06-1.10)HE染色細(xì)胞形態(tài)及Bax，Bcl-2免疫組化檢測結(jié)果位于低信號(hào)和高信號(hào)

8、組之間。Bax，Bcl-2光密度結(jié)果：隨著MRI T2信號(hào)比值逐漸增大，Bax光密度值逐漸加大，Bcl-2光密度值逐漸減小，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(采用雙向變量回歸與相關(guān)分析)各結(jié)果，MRI信號(hào)比值與灰質(zhì)Bax，白質(zhì)Bax成正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為：0.87、0.90；MRI信號(hào)比值與灰質(zhì)Bcl-2，白質(zhì)Bcl-2成負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為：0.88、0.86。
　　結(jié)論：慢性壓迫性脊髓損傷導(dǎo)致的MRI T2高信號(hào)出現(xiàn)與神經(jīng)細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，并且