tPNS對hBMSCs誘導分化后神經元樣細胞生長狀態(tài)及凋亡的影響.pdf

1、目的：研究三七總皂苷(tPNS)與堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)在人骨髓間充質干細胞(hBMSCs)分化為神經元樣細胞過程中的誘導、抗凋亡作用及作用劑量。
　　 方法：hBMSCs 取自健康成年志愿者，全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、擴增、純化hBMSCs，流式細胞儀檢測hBMSCs表面的CD29、CD44、CD105、CD34分子，并測定細胞周期。取第3代hBMSCs，含20％胎牛血清的1mmol/L β-巰基乙醇(β-ME)預誘

2、導24h，繼而用20ng/mLbFGF（標準對照組）、1.0mg/mL tPNS（藥物組）、20ng/mL bFGF+(0.5 mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL) tPNS（低、中、高劑量聯(lián)合組）誘導液誘導，設立空白對照組。采用免疫細胞化學法鑒定神經細胞特異性抗原標記神經元特異性烯醇化酶(NSE)、微管相關蛋-2(MAP-2)和神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)的表達；MTT 法檢測各組誘導劑不同時間點對神經元樣細胞活力的影

3、響，TUNEL、Annexin V-FITC/PI 凋亡試劑盒測定誘導后各組細胞凋亡率。
　　 結果:1、成功分離培養(yǎng)出hBMSCs，流式細胞儀檢測表面標記為：CD29(+)、CD44(+)、CD105(+)、CD34(-)，分離培養(yǎng)的細胞符合hBMSCs表型特征；測定細胞周期示：高比例的G0/G1期細胞提示hBMSCs 具有高度分化潛能；
　　 2、免疫細胞化學法測定誘導后細胞：聯(lián)合組NSE、MAP-2陽性細胞比例高于

4、空白對照組、標準對照組及藥物組（P<0.05)，且bFGF與藥物聯(lián)合組各組之間隨著藥物劑量的增加神經元樣細胞特異性標志物陽性率也增加（P<0.05)，GFAP表達陰性；
　　 3、MTT測定誘導后細胞活力示：聯(lián)合組細胞的活性較對照組高（P<0.05)，聯(lián)合組間隨著藥物劑量的增加細胞活性也增高（P<0.05)，且細胞活性高、存活時間延長。
　　 4、分別用TUNEL、Annexin V-FITC/PI 凋亡試劑盒檢測誘導后

5、各組細胞凋亡率，誘導后聯(lián)合組細胞凋亡率明顯下降（P<0.05)，且聯(lián)合組中隨著藥物劑量的增加凋亡率隨之下降（P<0.05)。
　　 結論：1、tPNS與bFGF 均可誘導hBMSCs分化為神經元樣細胞，聯(lián)合組更能有效誘導使其表達神經細胞表面特異性抗原，且細胞活力較好，與藥物劑量呈正相關；
　　 2、tPNS與bFGF 誘導hBMSCs分化為神經元樣細胞后增殖能力強，聯(lián)合組誘導后細胞增殖能力及活力更強，存活時間明顯延長，與