轉基因植物產品檢測方法的研究.pdf

1、該研究比較了改良CTAB法、試劑盒法以及SDS法提取大豆、玉米、油菜等七種植物產品總DNA的產量、純度和效率.三種方法中,改良CTAB法提取植物總DNA的產量和純度最高,且成本較低,經濟實用;試劑盒法次之,雖其提取效率較高,但價格昂貴;SDS法提取的總DNA提取液中因含有較多的PCR擴增抑制物,因此不適于作為PCR擴增模板.通過紫外吸收、瓊脂糖凝膠電泳等實驗比較得出,改良CTAB法和試劑盒法純化所得到的DNA純度均適用于PCR擴增等下游

2、檢測.在植物總DNA提取液產量和純度均達到下游檢測要求的基礎上,對植物產品進行轉基因成分定性和定量檢測.通過DNAMAN PCR擴增引物設計軟件設計了針對大豆、玉米等轉基因植物中CaMV35S啟動子、NOS終止子、FMV35S啟動子等特異性引物,對PCR擴增條件進行優(yōu)化,以上述優(yōu)化的體系對七種植物產品進行轉基因成分檢測的初步篩選;在此基礎上,根據不同植物產品中所轉入的外源目標基因,通過PCR擴增進行品系檢測和鑒定.PCR擴增產物經瓊脂糖

3、凝膠電泳,結果表明:可得到預期大小的DNA片段,經過PCR擴增產物的回收、克隆、測序,對結果進行驗證,可得到預期的測序結果.在定性檢測的基礎上,對陽性轉基因植物產品進行實時熒光定量PCR檢測.根據轉入的外源基因的序列設計特異性引物和Taqman探針,通過在線分析基因起始拷貝數的方式,以不同含量的標準樣品的Ct值制成標準曲線,再根據待測樣品的Ct值可準確測定起始DNA的數量,通過內源基因Lectin校正系統(tǒng)檢測誤差,計算轉基因植物產品的含