IL-6通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)CD44+CD24--low細(xì)胞的產(chǎn)生促進(jìn)了乳腺癌MCF7細(xì)胞的惡性行為.pdf

1、乳腺癌嚴(yán)重危害著女性的生命和健康，是全球女性最常見的惡性腫瘤，在北美、北歐一些國(guó)家，乳腺癌發(fā)病率占所有女性惡性腫瘤的25％～30％，半個(gè)多世紀(jì)以來，對(duì)乳腺癌的基礎(chǔ)和臨床研究都取得了很大的進(jìn)展，提高了臨床治療效果，在發(fā)達(dá)國(guó)家乳腺死亡水平已經(jīng)在10多年前發(fā)生轉(zhuǎn)折，由持續(xù)上升轉(zhuǎn)為顯著下降。亞洲乳腺癌發(fā)病水平在國(guó)際上居中等水平，但增長(zhǎng)趨勢(shì)明顯，死亡率相對(duì)較高，與發(fā)達(dá)國(guó)家相比，中國(guó)的乳腺癌發(fā)病年齡較早，2008年，我國(guó)小于65歲乳腺癌患者占所有乳

2、腺癌患者的83.4％，中國(guó)乳腺癌患者確診的平均年齡為45～55歲，乳腺癌有兩個(gè)發(fā)病高峰:45～55歲及70～74歲。眾所周知，月經(jīng)周期長(zhǎng)、未生育、初次生育年齡較大、不哺乳等是乳腺癌的危險(xiǎn)因素，對(duì)于中國(guó)女性來說，獨(dú)生子政策使得這些因素更為突出，多生孩子有助于降低乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)，此外，肥胖、高脂肪飲食和運(yùn)動(dòng)不足也增加乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)。通過早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療等二級(jí)預(yù)防及乳腺癌系統(tǒng)治療的逐漸完善的三級(jí)預(yù)防，乳腺癌的發(fā)展已經(jīng)得到有效的控制，病死率有下降

3、的趨勢(shì)。早期乳腺癌治療效果已經(jīng)相當(dāng)好，五年生存率在90％以上，但不管乳腺癌治療多有效，總還有30％～40％的乳腺癌患者最后會(huì)復(fù)發(fā)、會(huì)出現(xiàn)耐藥。隨著研究的不斷深入，腫瘤干細(xì)胞(cancerstem cells，CSCs)學(xué)說被科學(xué)家提出，他們認(rèn)為腫瘤干細(xì)胞是腫瘤中極小部分具有自我更新、無限增殖及分化潛能的細(xì)胞，腫瘤之所以能具有無限增殖能力，其根本在于腫瘤細(xì)胞中存在占極少數(shù)量的腫瘤干細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及治療抵抗的根源，它

4、對(duì)化療和放療都會(huì)產(chǎn)生抵抗。研究發(fā)現(xiàn)通過EMT過程能將永生化人乳腺上皮細(xì)胞(HMLEs)誘導(dǎo)成具有干細(xì)胞特征的乳腺癌干細(xì)胞，為EMT在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及促進(jìn)生長(zhǎng)中的作用提供了證據(jù)，且建立了上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化與腫瘤干細(xì)胞起源之間的聯(lián)系。IL-6是一種介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的主要因子，在腫瘤的病理生理學(xué)中起重要的作用。研究顯示，在乳腺癌病人中，血清IL-6的升高水平與不良的疾病預(yù)后相關(guān)。最近的研究顯示，IL-6是很強(qiáng)的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial

5、-mesenchymal transition，EMT)誘導(dǎo)因子，其能誘導(dǎo)上皮表型的乳腺癌細(xì)胞株向間充質(zhì)表型轉(zhuǎn)化;另一方面，最近報(bào)道EMT過程能在體外產(chǎn)生具有干細(xì)胞特性的CD44+CD24-/low標(biāo)記的乳腺癌干細(xì)胞亞群[10，11]，而這群細(xì)胞具有高致瘤性，對(duì)傳統(tǒng)化療藥物抵抗及高度的輻射抵抗能力。因此，我們推測(cè)IL-6有可能通過產(chǎn)生具有CD44+CD24-/low標(biāo)記的乳腺癌干細(xì)胞從而介導(dǎo)了乳腺癌細(xì)胞的增殖、化療抵抗及輻射抵抗。本研究

6、利用MCF7乳腺癌細(xì)胞株模型，深入研究IL-6對(duì)誘導(dǎo)MCF7細(xì)胞EMT及CD44+CD24-/low乳腺癌干細(xì)胞產(chǎn)生的作用，及對(duì)MCF7細(xì)胞增殖、阿霉素抵抗及輻射抵抗的影響，意在闡明IL-6促進(jìn)乳腺癌生長(zhǎng)、細(xì)胞輻射抵抗以及化療抵抗的潛在機(jī)制。
　　目的:
　　(1)IL-6能否有效誘導(dǎo)乳腺癌MCF7細(xì)胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化;
　　(2)探討誘導(dǎo)后的MCF7是否增加了CD44+CD24-/low標(biāo)記乳腺癌干細(xì)胞的比例;<

7、br>　　(3)分析經(jīng)誘導(dǎo)后產(chǎn)生的CD44+CD24-/low細(xì)胞是否具有更強(qiáng)的增殖、輻射、化療抵抗能力。
　　方法:
　　(1)利用含50ng/ml IL-6的培養(yǎng)基培養(yǎng)MCF7細(xì)胞;
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD44+CD24-/low乳腺癌干細(xì)胞含量的變化;
　　(3)real time-RT-PCR及westernbloting技術(shù)檢測(cè)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記分子的表達(dá)水平;
　　(4)流式細(xì)胞術(shù)從誘導(dǎo)

8、組中分選出CD44+CD24-/low乳腺癌干細(xì)胞群體;
　　(5)CCK8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖及對(duì)阿霉素藥物的敏感性;
　　(6)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)阿霉素對(duì)細(xì)胞凋亡的作用;
　　(7)克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞的輻射抵抗能力。
　　結(jié)果:
　　(1)IL-6能誘導(dǎo)MCF7細(xì)胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)樣轉(zhuǎn)化
　　(2)誘導(dǎo)5天后CD44+CD24-/low細(xì)胞顯著富集
　　(3)IL-6增