EGFL7通過上皮-間質轉化促進胰腺癌侵襲的實驗研究.pdf

1、第一部分 EGFL7在人胰腺癌細胞株中的表達
　　目的:研究Patu8988、PANC-1、BxPC-3、Capan-1胰腺癌細胞EGFL7的表達狀況，為后續(xù)研究做好準備。
　　方法:常規(guī)培養(yǎng)Patu8988、PANC-1、BxPC-3、Capan-1胰腺癌細胞，Real-time PCR、Western blot方法檢測EGFL7 mRNA和蛋白的表達。
　　結果:Real-time PCR顯示上述4株胰腺癌細胞中E

2、GFL7 mRNA相對量分別為：1.73±0.15、2.26±0.20、1.53±0.10、1.00±0.10，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Western blot顯示上述4株胰腺癌細胞中EGFL7蛋白相對量分別為：0.26±0.03、0.32±0.04、0.23±0.02、0.15±0.02，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），其中PACN-1細胞的EGFL7表達量最高。
　　結論:在Patu8988、PANC-1、BxPC

3、-3、Capan-1胰腺癌細胞中，PANC-1細胞EGFL7表達量最高。
　　第二部分靶向EGFL7的siRNA干擾質粒的構建與篩選
　　目的:構建并篩選靶向EGFL7沉默效果最佳的siRNA干擾質粒。
　　方法:根據GenBank中EGFL7的基因序列，設計4條靶向人EGFL7的siRNA序列，與干擾載體共轉染PANC-1細胞，Real-time PCR、Western blot篩選出最佳干擾序列。
　　結果:

4、靶向EGFL7基因重組siRNA干擾質粒構建成功，并能有效抑制EGFL7的表達，且EGFL7-siRNA-1效果最佳。
　　結論: EGFL7-siRNA-1干擾質粒對PANC-1細胞EGFL7的沉默效果最佳。
　　第三部分EGFL7對胰腺癌PANC-1細胞侵襲的影響及機制探討.
　　目的:研究EGFL7靶向沉默后人胰腺癌PANC-1細胞侵襲能力的改變，及EMT相關標志物表達的改變。
　　方法:實驗細胞分為PAN

5、C-1（空白對照組）、NC-PANC-1（陰性對照組）、si-PANC-1（實驗組）三組。各組細胞連續(xù)培養(yǎng)120h，分別在轉染24h、48h、72h、96h、120h后MTT法檢測增殖活性。轉染后72h，Transwell檢測各組細胞的侵襲能力。Real-timePCR、Western blot檢測E-Cadherin、N-Cadherin、Fibronectin、Vimentin mRNA和蛋白的表達。
　　結果:MTT實驗顯示

6、，轉染24h、48h、72h、96h、120h后3組細胞的增殖活性差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。Transwell侵襲實驗顯示，轉染后72小時3組的侵襲細胞數(shù)分別為79±5.0、70.2±4.0、30±2.5，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Real-time PCR和Western blot顯示：si-PANC-1組E-Cadherin mRNA及蛋白較其他兩組顯著升高(P<0.05)，而N-Cadherin、Fibronect