GM-CSF誘導成纖維細胞MMP-2和MMP-9的表達及機制研究.pdf

1、研究目的：
　　探討單核巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)對人皮膚成纖維細胞MMP-2、MMP-9表達的影響以及其分子生物學機制。
　　研究方法：
　　1）ELISA、明膠酶譜及Western Blot檢測不同GM-CSF濃度（0、10、50、100、500ng/ml）刺激下MMP-2和MMP-9在成纖維細胞中的表達情況；
　　2）免疫熒光及Western Blot檢測GM-CSF及SP600125（JNK抑制

2、劑）對成纖維細胞內JNK/c-Jun磷酸化水平的影響，RT-PCR分別檢測GM-CSF或SP600125+GM-CSF對成纖維細胞內MMP-2/-9 mRNA合成的影響，ELISA分別檢測GM-CSF或SP600125+GM-CSF處理成纖維細胞后（6、12、24、48h）MMP-2/-9的濃度；
　　3）cck-8試劑盒檢測GM-CSF對成纖維細胞增殖的影響，細胞劃痕實驗檢測GM-CSF對成纖維細胞遷移能力的影響。
　　研

3、究結果：
　　1）GM-CSF處理后，人皮膚成纖維細胞MMP-2/-9的表達均明顯高于對照組（P<0.05），MMP-2/-9的表達量及活性與GM-CSF濃度呈正相關；
　　2）GM-CSF處理后，成纖維細胞內JNK/c-Jun的磷酸化水平明顯高于對照組（P<0.05）；MMP-2/-9的mRNA轉錄水平顯著高于對照組（P<0.05）；SP600125預處理后，與GM-CSF組相比，c-Jun的磷酸化明顯被抑制（P<0.05

4、），MMP-2/-9的mRNA水平則顯著降低（P<0.05）；GM-CSF處理細胞后，上清中MMP-2/-9的濃度在24小時達到最高值，24-48小時逐漸降低，但均顯著高于對照組（P<0.05）；在SP600125+GM-CSF組，MMP-2的表達低于對照組，而MMP-9的表達明顯高于對照組（P<0.05）；
　　3）GM-CSF對成纖維細胞的增殖無明顯影響（P>0.05）；GM-CSF能夠促進成纖維細胞的遷移（P<0.05），而