視網(wǎng)膜色素變性患者自體誘導多潛能干細胞系的建立與應用.pdf

1、學校代碼：10023學號：200601086視網(wǎng)膜色素變性患者自體誘導多潛能干細胞系的建立與應用專業(yè)年級：北京協(xié)和醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)2006級姓名：王繹忱導師：董方田(教授)北京協(xié)和醫(yī)學院臨床學院(北京協(xié)和醫(yī)院)眼科完成日期：2014年6月摘要背景：視網(wǎng)膜變性疾病是一類以進行性視功能下降為臨床特征的疾病，具有遺傳性或后天獲得性，是臨床上多見而又難治的一類致盲性眼病。視網(wǎng)膜色素變性作為最常見的遺傳性視網(wǎng)膜變性疾病，其遺傳方式多樣，致病基因

2、多種，深入的致病機制仍然不明確，目前尚無有效的治療方法。對于視網(wǎng)膜變性疾病，由于其取材的受限性，難以建立體外細胞研究模型。2007年日本科學家Yamanaka等人發(fā)明了人類體細胞誘導的多潛能干細胞(humaninducedpluripotentstemcell，hiPSC)技術。通過這一技術，理論上可產(chǎn)生大量的與胚胎干細胞同等分化潛能的多潛能干細胞。利用患者自身的體細胞誘導產(chǎn)生的hiPS細胞及其分化產(chǎn)生的視網(wǎng)膜細胞，可為視網(wǎng)膜變性疾病建

3、立體外的細胞研究模型。hiPS細胞以及其分化產(chǎn)生的各類視網(wǎng)膜細胞還可在各類視網(wǎng)膜變性疾病中探索干細胞替代治療，為攻克此類難治的致盲性眼病帶來希望。目的：本課題研究目的在于：(1)將視網(wǎng)膜色素變性患者的皮膚成纖維細胞，通過導入外源基因，誘導其成為多潛能干細胞(hjPSC)；(2)在此過程中探索視網(wǎng)膜變性患者體細胞重編程的機制過程，并為進一步向視網(wǎng)膜細胞的定向分化及機制研究奠定基礎。材料和方法：本研究取IFTl40基因突變的視網(wǎng)膜色素變性的

4、1名患者及1名正常對照受試者的皮膚組織樣本進行原代培養(yǎng)，建立人皮膚成纖維細胞系(humandermalfibroblast，HDF)。并取CF1品系小鼠135天胚胎，分離并培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細胞(mouseembryonicfibroblast，MEF)，培養(yǎng)至P3代后，經(jīng)絲裂霉素C處理后制成飼養(yǎng)層細胞(feedercell)。實驗中利用含Oct4、K1f4、Sox2、cMyc四種重組基因的慢病毒質(zhì)粒以及慢病毒包裝質(zhì)粒PVSVG和△89