河南省斷奶前犢牛隱孢子蟲(chóng)種類(lèi)及基因型研究.pdf

1、隱孢子蟲(chóng)?。–rytosoridiosis）是一種全球性的人獸共患寄生性原蟲(chóng)病，其病原隱孢子蟲(chóng)（Cryptosporidium）是一種常見(jiàn)的人獸共患原蟲(chóng)，可以感染廣泛的脊椎動(dòng)物宿主。近年來(lái)，基于分子生物學(xué)技術(shù)的研究，從奶牛中鑒定出8個(gè)隱孢子蟲(chóng)種類(lèi)和2個(gè)基因型，包括C.parvum,C．bovis,C.andersoni,C.ryanae,C.felis，C.hominis,C.suis,C.canis,C.suis-likegenoty

2、pe和Cryptosporidium pig genotypeⅡ，其中，微小隱孢子蟲(chóng)Cparvum為重要的感染人的隱孢子蟲(chóng)種類(lèi)。
　　 為了解水牛腸道寄生蟲(chóng)感染情況，采用盧戈氏碘液染色法、離心沉淀法、飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法對(duì)信陽(yáng)市李家寨和張家寨散養(yǎng)的成年水牛的共357份新鮮糞便樣品進(jìn)行腸道寄生蟲(chóng)感染情況調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)302份樣品呈陽(yáng)性，寄生蟲(chóng)總感染率為84.59％，其中水牛球蟲(chóng)感染率最高，達(dá)76.75%，水牛隱孢子蟲(chóng)

3、、環(huán)孢子蟲(chóng)、吸蟲(chóng)、圓線蟲(chóng)、仰口線蟲(chóng)、鞭蟲(chóng)、絳蟲(chóng)感染率分別為3.36%，2.52%，7.07%，25.77%，9.80%，4.76%，0.56%。本次調(diào)查為臨床治療和預(yù)防水牛腸道寄生蟲(chóng)病提供了參考和依據(jù)。
　　 為建立國(guó)內(nèi)牛源C parvum新生犢牛動(dòng)物模型，將牛源C.parvum卵囊用導(dǎo)管灌胃接種1頭3日齡未吃初乳的荷斯坦公犢牛，對(duì)排卵囊規(guī)律、臨床表現(xiàn)及組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。試驗(yàn)結(jié)果顯示，感染后3d有卵囊排出，感染后第7d糞

4、便卵囊計(jì)數(shù)明顯增加，出現(xiàn)高峰期。本試驗(yàn)成功感染新生犢牛，建立了C.parvum新生犢牛動(dòng)物模型，為C.parvum卵囊大量擴(kuò)增和進(jìn)一步研究其生物學(xué)特性等提供了重要的參考依據(jù)。
　　 為了解河南省斷奶前犢牛隱孢子蟲(chóng)感染情況，用福爾馬林-乙酸乙酯離心沉淀法、飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸抗酸染色法，對(duì)河南省鄭州、中牟、新密、新鄉(xiāng)、洛陽(yáng)、焦作和商丘7個(gè)地區(qū)8個(gè)奶牛場(chǎng)792份斷奶前犢牛糞便樣品進(jìn)行檢查。結(jié)果表明，8個(gè)奶牛場(chǎng)中隱孢子蟲(chóng)感染率

5、最高為26.77%(34/127)，最低為10.479%(9/86)，總感染率21.12%(168/792)。各個(gè)年齡段中，2周齡犢牛感染率最高，達(dá)33.08%(44/133)，1周齡感染率最低，為7.27%(4/55)。共發(fā)現(xiàn)2種不同形態(tài)的隱孢子蟲(chóng)卵囊，依據(jù)形態(tài)數(shù)值初步鑒定為C.parvum和C.andersoni。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)C.par vum在斷奶前犢牛中具有較高的感染率，具有重要的公共衛(wèi)生意義。
　　 為了解河南省斷奶前

6、犢牛隱孢子蟲(chóng)感染情況及評(píng)估斷奶前犢牛在隱孢子蟲(chóng)人獸共患傳播中的作用，本試驗(yàn)利用巢式Nested PCR對(duì)168個(gè)斷奶前隱孢子蟲(chóng)分離株18SrRNA基因和60-kDa糖蛋白(GP60)基因特定片段進(jìn)行擴(kuò)增，然后利用限制性內(nèi)切酶SspI和MboⅡ?qū)CR-18SrRNA基因產(chǎn)物進(jìn)行消化酶切進(jìn)行PCR-RLFP分析初步確定隱孢子蟲(chóng)種類(lèi)。通過(guò)進(jìn)一步對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行測(cè)序和序列比對(duì)，共鑒定出4個(gè)隱孢子蟲(chóng)種類(lèi)和基因型，包括微小隱孢子蟲(chóng)（C.parvum

7、）、牛隱孢子蟲(chóng)（C.bovis）、瑞氏隱孢子蟲(chóng)（C.ryanae）和安氏隱孢子蟲(chóng)（C.andersoni）。其中，微小隱孢子蟲(chóng)（C.parvum）和牛隱孢子蟲(chóng)（C.bovis）為斷奶前犢牛盼優(yōu)勢(shì)蟲(chóng)株感染率均為38.46%(65/157)，出現(xiàn)在各個(gè)年齡段（1周齡～2月齡）。GP60序列分析表明，斷奶前犢牛的微小隱孢子蟲(chóng)（C.par vum）GP60亞型均為Ⅱd亞型家族，命名為ⅡdA19G1。
　　 本研究表明，河南省斷奶前犢牛微