Ara-C在酵母菌、白血病細(xì)胞和AML小鼠模型中的抗性研究.pdf

1、目的：以酵母菌、白血病細(xì)胞、非免疫缺陷AML小鼠為模型，尋找Ara-C抗性相關(guān)基因，研究Ara-C代謝通路中關(guān)鍵基因DCK的變化以及耐藥相關(guān)的抗凋亡途徑的變化。
　　方法：（1）piggyBac(PB)轉(zhuǎn)座系統(tǒng)中的質(zhì)粒構(gòu)建，將 PB轉(zhuǎn)座子元件中的PB轉(zhuǎn)座酶序列和識(shí)別序列分別連接到兩個(gè)穿梭質(zhì)粒中；（2）YHL912菌株對(duì)G418的敏感性檢測(cè)；（3）采用醋酸鋰轉(zhuǎn)化法，將構(gòu)建好的PB表達(dá)質(zhì)粒、供體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入YHL912裂殖酵母中；（4

2、）運(yùn)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性；（5） AnnexinV-FITC和 PI雙染法檢測(cè)ABT-737對(duì)白血病細(xì)胞凋亡的影響；（6）采用AML小鼠模型，研究ABT-737與Ara-C的聯(lián)合使用，對(duì)小鼠生存情況的影響。
　　結(jié)果：（1）PB轉(zhuǎn)座系統(tǒng)能夠有效地插入酵母基因組中；（2）G418對(duì)YHL912酵母菌株的最小抑制濃度為300ug/mL；（3）DCK基因在具有Ara-C抗性的AML細(xì)胞中，存在點(diǎn)突變、缺失突變，表達(dá)降低等現(xiàn)象

3、，隨著抗藥程度的增加，突變比例呈升高趨勢(shì)；（4）ABT-737的聯(lián)合使用能夠有效的改善因細(xì)胞內(nèi)部抗性而導(dǎo)致的AML小鼠生存期縮短的現(xiàn)象。
　　結(jié)論：PB轉(zhuǎn)座子二元轉(zhuǎn)座系統(tǒng)能夠有效地插入酵母基因組中，從而為下一步篩選耐藥突變菌株，尋找耐藥相關(guān)的新基因提供了基礎(chǔ)；DCK基因在具有 Ara-C抗性的AML細(xì)胞中，存在點(diǎn)突變、缺失突變，表達(dá)降低等現(xiàn)象，這可能是導(dǎo)致抗藥性產(chǎn)生的一個(gè)重要原因；抗凋亡蛋白抑制劑 ABT-737的聯(lián)合使用能夠有效