Livin、c-cbl在白血病細胞中的表達及臨床意義.pdf

1、研究背景與目的: 凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosisprotein，IAP）是一類含眾多成員的凋亡抑制蛋白家族，在抑制凋亡和促進腫瘤細胞增生中起著重要的作用。Livin是新發(fā)現(xiàn)的IAP家族成員之一，像其它IAP成員一樣主要是通過和Caspase蛋白結(jié)合，例如caspase-3、caspase-7和caspase-9，從而抑制其級聯(lián)激活反應而發(fā)揮抗凋亡作用。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)Livin在各種腫瘤細胞和轉(zhuǎn)化細胞有高表

2、達，在大多數(shù)正常分化組織中低表達或不表達，這種凋亡抑制基因的分布可能導致腫瘤的進展。這一表達的特異性使Livin基因成為目前國際研究的熱點。 Casitas B-lineage lymphoma（Cbl）是一類廣泛分布的細胞內(nèi)蛋白，在哺乳類中有c-Cbl、Cbl-b和Cbl-3三種。Cbl家族擁有N端的TKB結(jié)構(gòu)域介導與多種受體型蛋白酪氨酸激酶的結(jié)合，并有個作為泛素結(jié)合酶E3的RING結(jié)構(gòu)域。因此正常情況下Cbl的這種負調(diào)控P

3、TK作用對于維持細胞內(nèi)穩(wěn)機制具有重要意義。近年來的研究表明，突變的Cbl可成為癌基因，其可以與激活的受體型蛋白酪氨酸激酶（RTK）相互作用而導致腫瘤的發(fā)生。c-cbl最近被證明是泛素-蛋白酶體（ubiquitin-proteasome）通路中的一個新的RING Finger型泛素連接酶（uoiquitin ligase，E3）。c-cbl可以介導受體酪氨酸激酶和非受體酪氨酸受體激酶的降解。目前，在白血病方面對livin基因和c-cbl基

4、因的研究尚較少。本研究旨在檢測Livin和c-cbl mRNA在白血病中表達并分析其臨床意義。 研究內(nèi)容和方法: 1、細胞培養(yǎng)用DMEM高糖培養(yǎng)基37℃，5%CO2培養(yǎng)復蘇后的M14細胞，用于提取總RNA用作RT-PCR檢測Livin基因的陽性對照。 2、把克隆的livin基因片段連接到質(zhì)粒PMD20-T vector，構(gòu)建陽性對照質(zhì)粒。 3、應用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應（reverse transcript

5、ion polymerase chain reaction，RT-PCR）方法檢測了67例急性白血病患者及13例慢性粒細胞白血病患者的骨髓或外周血單個核細胞Livin和c-cbl基因mRNA表達水平。其中初發(fā)ANLL患者47例（初治組），有45例可進行療效評估（2例未治療），其中30例化療1療程達CR（緩解組），緩解組中4例于觀察期間復發(fā)（復發(fā)組）；初發(fā)ALL患者20例（初治組），有17例可進行療效評估（3例未治療），其中14例化療1療

6、程達CR（緩解組），緩解組中3例于觀察期間復發(fā)（復發(fā)組），20名健康人作為正常對照（NC）。 結(jié)果: 1.成功建立穩(wěn)定、特異檢測livin基因和c-cbl基因表達的RT-PCR方法。 2.ANLL患者中，livin基因mRNA表達率為66.0%（31/47例）；CML患者livin基因mRNA表達率為61.5%（8/13例）； ALL患者中，livin基因表達率為75.0%（15/20例）。對照組20例的livi

7、n mRNA表達為陰性。ANLL、CML、ALL之間livin mRNA的表達率比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。 3.C-cbl mRNA在ANLL細胞中的表達c-cbl mRNA在初治ANLL中陽性率為57.4%（27/47），在正常人中的表達率為100.0%（20例全部陽性）；兩組相比差異具有顯著性（P<0.005）。ALL患者中，c-cbl基因陽性率為55.0%（11/20例）。CML患者c-cbl基因mRNA陽性率為6

8、1.5%（8/13例）；ANLL、CML、ALL之間livin mRNA的表達率比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。 結(jié)論: 1.初治急性白血病患者Livin mRNA表達水平明顯高于正常對照組，復發(fā)組表達水平明顯高于正常對照組，但與初治組無顯著差別。livin基因表達陽性的患者完全緩解率較livin基因表達陰性的患者低。提示livin可能作為急性白血病的發(fā)病、復發(fā)及預后判斷的指標之一。 2.初治急性白血病患者c-