c-Cbl、Cbl-b在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的：
　　 結(jié)直腸癌是世界范圍內(nèi)最常發(fā)生的惡性腫瘤之一,在我國(guó)其發(fā)病率和死亡率逐年升高,目前死亡率已躍居惡性腫瘤第2位。盡管確診時(shí)70-80%的患者可以進(jìn)行根治性手術(shù)切除,但總體的5年生存率仍只有50-60%。約2/3接受過(guò)根治手術(shù)的患者發(fā)生復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移部位有:肝臟、肺、骨、腦、腎上腺,為血行轉(zhuǎn)移所致。因此,全身化療既是早中期結(jié)直腸癌術(shù)后輔助治療的主要手段,也是晚期結(jié)直腸癌姑息治療的主要手段。近年來(lái),隨著腫瘤分子

2、生物學(xué)研究的深入,為腫瘤的藥物治療提供了分子靶向治療這種新模式。分子靶向治療制劑因其高效低毒的特性,越來(lái)越引起臨床醫(yī)師的重視,目前的研究大多集中在與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和凋亡調(diào)控機(jī)制相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。
　　 c-Cbl和Cbl-b是Cbl(CasitasB-lineagelymphoma)家族的重要成員,Cbl是在進(jìn)化上相對(duì)保守的一類廣泛分布的細(xì)胞內(nèi)蛋白,Cbl蛋白中含有多個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域,在細(xì)胞的活化過(guò)程中可作為接頭蛋白或支架蛋白參

3、與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo);同時(shí)由于Cbl中包含N-端保守的TKB和RING結(jié)構(gòu)域,使Cbl成為泛素連接酶E3家族(RING型E3)重要的一員。通過(guò)TKB及其他結(jié)構(gòu)域識(shí)別并結(jié)合靶蛋白,RING結(jié)構(gòu)域募集泛素結(jié)合酶E2,從而啟動(dòng)泛素化降解途徑。參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)向調(diào)控,這對(duì)于維持細(xì)胞的內(nèi)穩(wěn)態(tài)具有重要作用。
　　 c-Cbl、Cbl-b在結(jié)直腸癌中的表達(dá),及其與臨床病理因素和生存的相關(guān)性研究在國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。
　　 本研究構(gòu)建了結(jié)直腸癌

4、組織芯片,應(yīng)用免疫組化SP法,檢測(cè)c-Cbl和Cbl-b蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況,并分析其與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系以及對(duì)生存的影響,旨在探討c-Cbl和Cbl-b在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。
　　 材料和方法：
　　 一、組織標(biāo)本
　　 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院和遼寧省腫瘤醫(yī)院2005年8月至2006年6月手術(shù)切除的結(jié)直腸癌組織標(biāo)本128例,術(shù)前未行放療、化療及免疫治療。其中男性74例,女性54例。

5、年齡31歲～81歲,中位年齡55歲。病理類型均為腺癌(有5例無(wú)法評(píng)價(jià)分化程度),分為低級(jí)別結(jié)直腸癌和高級(jí)別結(jié)直腸癌2組,其中低級(jí)別組包括:高分化(管狀)腺癌,中分化(管狀)腺癌,乳頭狀腺癌,共108例:高級(jí)別組包括:低分化(管狀)腺癌,粘液腺癌,共15例。結(jié)直腸癌分期采用美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)第6版分期標(biāo)準(zhǔn),其中T1為2例,T2為19例,T3為89例,T4為18例;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例;發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移5例;Ⅰ期患者14例,Ⅱ期患者

6、67例,Ⅲ期患者42例,Ⅳ期患者5例。
　　 二、試劑
　　 鼠抗人c-Cbl單克隆抗體購(gòu)自BD公司;鼠抗人Cbl-b單克隆抗體購(gòu)自SANTACRUZ公司;SP檢測(cè)試劑盒及DAB顯色液均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。
　　 三、方法
　　 將128例結(jié)直腸癌標(biāo)本制作成組織芯片,采用免疫組化SP法,按照SP檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書所示步驟進(jìn)行。
　　 四、免疫組化結(jié)果判斷
　　 c-Cbl、Cb

7、l-b均以胞膜和/或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色,于顯微鏡400倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)有代表性的不同區(qū)域,每個(gè)視野的得分由陽(yáng)性細(xì)胞的比例和顯色強(qiáng)度兩方面決定,依照陽(yáng)性細(xì)胞比例:≤5%、6-25%、26-50%、51-75%、≥76%分別得0分、1分、2分、3分、4分;依照顯色強(qiáng)度:未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別得0分、1分、2分、3分;將兩項(xiàng)得分相乘得到該視野的最終得分,選取的5個(gè)視野得分的平均值為最后得分。最后該切片按照得分分為以下

8、四個(gè)等級(jí):0-1分為(-),2-4分為(+),5-7分(++),≥8分為(+++)。(-)～(+)為陰性表達(dá),(++)(+++)為陽(yáng)性表達(dá)。
　　 五、統(tǒng)計(jì)分析
　　 以SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,c-Cbl、Cbl-b的表達(dá)與臨床病理因素之間的關(guān)系應(yīng)用四格表X2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析;c-Cbl、Cbl-b的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系采用Kaplan-Meier生存率曲線及Log-rank檢

9、驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 一、c.Cbl,Cbl-b的表達(dá)情況
　　 在128例結(jié)直腸癌標(biāo)本中有67例c-Cbl高表達(dá),陽(yáng)性率為52.3%;127例結(jié)直腸癌標(biāo)本中有92例Cbl-b高表達(dá),陽(yáng)性率為71.7%;
　　 二、c.Cbl,Cbl-b的表達(dá)與臨床及病理因素之間的關(guān)系
　　 經(jīng)相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析顯示c-Cbl的表達(dá)與性別、年齡、分化程度、浸潤(rùn)深度、臨床分期以

10、及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理因素?zé)o顯著相關(guān)性(P＞0.05);而Cbl-b的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.204,P=0.024),與性別、年齡、浸潤(rùn)深度、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理因素?zé)o顯著相關(guān)性(P＞0.05);
　　 三、c-Cbl,Cbl-b的表達(dá)與生存的關(guān)系
　　 截止時(shí)間為2011年9月,在128例患者中有共有43例完成了隨訪,其中死亡19例,存活24例,死亡率為44.2%。C-Cbl陽(yáng)性組患者生存率為60.0

11、%,陰性組患者生存率為52.2%,陽(yáng)性組略高于陰性組,但兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.514)。Cbl-b陽(yáng)性組患者生存率為60.7%,陰性組患者的生存率為42.9%,陽(yáng)性組高于陰性組,但兩者差異不顯著(P=0.220)。
　　 為進(jìn)一步明確c-Cbl、Cbl-b對(duì)結(jié)直腸癌生存的影響,針對(duì)3年生存期進(jìn)行分析,c-Cbl陽(yáng)性組患者生存率為85.0%,陰性組患者生存率為69.6%,陽(yáng)性組高于陰性組,但兩者差異不顯著(P=0.267)

12、。Cbl-b陽(yáng)性組患者生存率為85.7%,陰性組患者生存率為57.1%,陽(yáng)性組明顯高于陰性組,差異接近有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.052)。
　　 結(jié)論：
　　 1、c-Cbl表達(dá)與性別、年齡、分化程度、浸潤(rùn)深度、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理因素?zé)o顯著相關(guān)性;
　　 2、Cbl-b表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.204,P=0.024),而與性別、年齡、浸潤(rùn)深度臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理因素?zé)o顯著相關(guān)性;