呼吸道合胞病毒感染的大鼠氣道上皮細胞對樹突狀細胞成熟和功能的影響.pdf

1、目的：和意義:
　　 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是人類下呼吸道感染和支氣管哮喘加重的常見因為,但是RSV導致變態(tài)反應敏感性增高和引起哮喘的免疫機制仍然未明。本課題研究的目的是探索RSV感染的氣道上皮細胞對大鼠髓系樹突狀細胞(myeloid dendritic cells,mDCs)激活和功能的影響,為進一步研究RSV誘發(fā)和加重哮喘的機制提供依據。
　　 方法：

2、　　 1、首先我們使用改進后的酶消化法分離了大鼠原代氣道上皮細胞,并且于支氣管上皮培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得成功。2、在對RSV進行擴增和滴度測定后,我們以不同的作用時間,和不同滴度的RSV感染大鼠原代氣道上皮細胞,并且使用Real time PCR的方法檢測胸腺基質淋巴細胞生成素(Thymic stromal.lymphopoietin,TSLP)在大鼠原代氣道上皮細胞的表達。3、接著我們分離并且培養(yǎng)擴增了大鼠mDCs,并且采用transwe

3、ll細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)將大鼠原代氣道上皮細胞和大鼠mDCs進行共培養(yǎng)。4、共培養(yǎng)后的大鼠mDCs通過Real time PCR和Flow cytometry檢測了成熟標志物和Th2細胞因子的表達。5、為了證實共培養(yǎng)后的大鼠mDCs有無功能性成熟,我們對其進行了同種異體混合淋巴細胞反應(mixedlymphocyte reaction,MLR)的檢測。6、為了進一步研究RSV感染的氣道上皮細胞對mDCs的激活和功能的影響的機制,特別是TSLP

4、在其中發(fā)揮的作用,我們合成了針對大鼠TsLP mRNA表達的siRNA,以一種具有永生化特征的大鼠氣道上皮細胞株RTECs(rat tracheae epithelialcells,an immortalized cell strain)為研究對象,轉染siTSLP至RTECs并下調其TSLP的表達,隨后觀察這些經過siTSLP預處理的RTECs在感染RSV后是否仍有影響大鼠mDCs激活和功能性成熟的能力。7、最后我們再次使用RNA干擾

5、的方法初步探討了鐘樣受體(Toll-like ReceptorsTLRs)在RSV誘導的大鼠氣道上皮細胞TSLP表達中的作用,以及其對共培養(yǎng)后的大鼠mDCs表達Th2細胞因子的影響。
　　 結果：
　　 1、我們發(fā)現(xiàn)RSV感染的原代大鼠氣道上皮細胞表達TSLP出現(xiàn)迅速(6小時)且較持久(18小時)的增高。2、我們還證實RSV感染的原代大鼠氣道上皮細胞表達TSL的增高主要是由TLR3而不是TLR4介導的。3、大鼠mDCs在

6、與RSV感染的原代大鼠氣道上皮細胞共培養(yǎng)后出現(xiàn)了功能性成熟,包括大鼠mDCs表面共刺激分子MHCII和CD86的表達增多,OX40L和TARC的mRNAs表達增高,而大鼠mDCs刺激T細胞增殖的能力也獲得了增強。4、大鼠mDCs出現(xiàn)的激活和功能性成熟,在與經過siTSLP預處理并且隨后感染RSV的RTECs共培養(yǎng)時受到明顯的抑制。
　　 結論：
　　 我們的研究結果顯示RSV能夠誘導大鼠氣道上皮細胞表達TSLP,而TSL