Iodogen125I標記CD28單克隆抗體2F5的實驗研究.pdf

1、目的：研究125Ⅰ標記CD28單克隆抗體2F5的方法及標記物125Ⅰ-2F5的生物學活性及體外穩(wěn)定性，探討125Ⅰ-2F5對特定腫瘤放射性免疫顯像的可行性。
　　 方法：1.采用Iodogen法125Ⅰ標記單抗2F5，測定t25Ⅰ-2F5的標記率；紙層析法測定125Ⅰ-2F5的放射化學純度；將125Ⅰ-2F5與不同細胞數的小鼠淋巴瘤細胞轉人CD28基因細胞株CD28-T細胞懸液置于37℃細胞培養(yǎng)箱中反應，測定標記物的免疫活性；將

2、標記物按1:20的比例分別加入到生理鹽水和新鮮人血清中，另取標記物不稀釋作為對照，分別置于37℃、4℃條件下，觀察放置0h、2h、4h、24h、48h后標記物的放化純度，以了解其穩(wěn)定性。2.自正常裸鼠尾靜脈注射1.11-1.67 MBq/100μL(30-45μCi/100μL)125Ⅰ-2F5后，不同時間點斷頸處死小鼠，同時取血液及各主要組織器官標本，計算各組織器官不同時間點的每克組織百分注射劑量率(％ID/g)；同樣方法，計算荷淋巴

3、瘤裸鼠模型血液、腫瘤及各組織器官16h、24h、48h的每克組織百分注射劑量率(％ID/g)和腫瘤/非腫瘤(T/NT)比值。3.選用4～6周齡雌性BALB/C裸鼠，建立荷淋巴瘤和非小細胞肺癌裸鼠模型，尾靜脈注射11.1-14.8MBq/200μL(300-400μCi/200μL)125Ⅰ-2F5并用SPECT進行放射免疫顯像，顯像前3d開始用1％碘化鉀溶液200μ L/d灌胃封閉甲狀腺，采用ROI(Region of interest

4、)技術在不同時相的顯像圖上勾畫腫瘤輪廓，并計算瘤體與對側相同部位的T/B比值。
　　 結果：1.125Ⅰ-2F5標記率為(68.12±6.19)％，純化后紙層析法測得即刻125Ⅰ-2F5的放射化學純度為(97.67±0.59)％，比活度為756.13 MBq/mg；125Ⅰ-2F5與CD28-T細胞的結合率隨細胞數的增加而增加，當細胞數為1×107個時結合率達到最高水平，此時總細胞結合率為(37.31±0.85)％，特異性細胞結

5、合率為(34.44±0.93)％；標記物加入到不同稀釋液中后，在4℃條件下，對照組24h后、生理鹽水組4h后放化純仍大于90％；在37℃條件下，對照組24h后、生理鹽水組4h后放化純仍大于90％；人血清組48h后的放化純?yōu)?74.59±2.69)％；2.125Ⅰ-2F5在正常裸鼠和荷淋巴瘤裸鼠體內主要通過腎臟和肝臟代謝；注射125Ⅰ-2F5后，腫瘤組織的放射性分布及腫瘤組織與各組織器官的T/NT比值隨時間延長逐漸上升，至24h達到最大值

6、；3.注射125Ⅰ-2F5后，荷淋巴瘤裸鼠放射免疫顯像腫瘤清晰可見；荷非小細胞肺癌裸鼠模型的瘤體組織未見明顯放射性濃聚。
　　 結論：1.Iodogen法125Ⅰ標記單抗2F5的標記率和放化純高，方法簡便，標記物的穩(wěn)定性好且保持較好的免疫活性。2.SPECT進行放射免疫顯像，可獲得優(yōu)質的淋巴瘤放射免疫圖像。3.本研究為不同放射性碘(123Ⅰ、125Ⅰ、131Ⅰ)標記單抗2F5以及建立淋巴瘤的放射免疫顯像和靶向治療方法提供實驗依據