糖尿病腎病患者循環(huán)microRNA表達譜的分析.pdf

1、糖尿病腎病(Diabetic nephropathy, DN)已成為全世界范圍內終末期腎衰竭的主要病因，其發(fā)生與血流動力學異常、多種細胞因子網絡以及遺傳易感性等諸多因素有關。但DN的分子發(fā)病機制目前尚不十分明確，治療方法有待完善。尋找DN早期診斷和早期預防的標志物，成為迫在眉睫需要解決的問題。微小核糖核酸(microRNA，簡稱miRNA)，是一類非編碼小分子單鏈RNA，與靶mRNA的3'-UTR及5'-UTR區(qū)的堿基互補配對，發(fā)揮轉錄

2、后調控作用，一個miRNA可同時調控多個基因表達，參與重要的生理和病理過程。循環(huán)miRNA存在于血清、血漿、尿液等體液中，在多種惡劣條件（如極端PH、反復凍融等）下仍然高度穩(wěn)定，目前已有相關文獻及報導指出，miRNA可作為腫瘤、心血管疾病、內分泌疾病等的生物標志物，并在診斷疾病或者判斷預后和復發(fā)，指導用藥和選擇治療方式中起到重要作用。但是DN患者循環(huán)miRNA的表達譜的研究目前尚未見報道。因此，我們此次試驗將對2型糖尿病腎病患者的循環(huán)m

3、iRNA進行研究。
　　 目的：
　　 本實驗通過分析正常對照組、糖尿病患者、DN患者循環(huán)miRNA表達譜的變化，確認在DN發(fā)病過程中發(fā)揮關鍵作用的miRNA，從循環(huán)miRNA水平探討DN的發(fā)病機制，為糖尿病腎病早期診斷尋找新的生物標志物。
　　 方法：
　　 采集15例個體的血清，分為3組:糖尿病腎病組(DN)，患者均為腎活檢病理明確為結節(jié)性糖尿病腎小球硬化癥（n=5，男性3人，女性2人）;糖尿病組(D

4、M)，按WHO的DM診斷標準于我院確診為2型糖尿?。╪=5，男性3人，女性2人）;健康對照組(N)，均系本院健康體檢篩查者（n=5，男性3人，女性2人）。將3組個體的血清，利用AB公司Taqman human miRNA array set v3.0A+B板低密度芯片進行芯片檢測。miR芯片結果用SYBR Green法進行mRNA RealTime RT-PCR驗證。對數據進行相關性分析。
　　 結果：
　　 同正常對照

5、組N相比，OGTTO分、120分在DM、DN組中呈現明顯增高(P＜0.01); HbAlc在DN組中顯著增高(P＜0.05);由于本次實驗選取的DM及N組患者均為尿蛋白陰性，因此尿MA、尿A/C在DN組中呈現明顯增高(P＜0.001);Urea在DN組中呈現明顯增高(P＜0.01);血肌酐、GFR、Cys-C在正常對照組、糖尿病組、糖尿病腎病組呈現逐漸遞增(P＜0.05)。
　　 miRNA芯片分析結果發(fā)現:與正常對照患者相比，

6、DM患者血清中，20個miRNA的表達上調，其中miR-572上調最明顯（4.22倍）;22個miRNA的表達下調，miR-15b下調最明顯(34.97倍)。與DM組相比，DN組miR-572下調4.61倍，miR-15b上調1.88倍。與DM組相比，DN患者血清中，42個miRNA的表達上調，其中miR-193a-5p與miR-517c上調最明顯（分別為8.07倍、7.95倍）;19個miRNA的表達下調，miR-127-3p下調最明

7、顯(28.49倍)。與N組相比，DM患者血清中miR-193a-5p下調2.09倍，miR-517c在N組中未檢測出，miR-127-3p上調3.97倍。N、DM、DN組中，miR-1179呈遞增式上調，miR-148b、miR-150呈遞減式下調。
　　 與既往文獻中已有的結果做對比可見，在DM/N中，循環(huán)miR-375上調(3.75倍)、miR-223下調（4倍）得到驗證。既往文獻中有報道DM同N相比，一些miRNA呈現上調

8、或下調的表達差異，在此次實驗中的DM/N未得到，但在DN/DM有相似變化:miR-27a(2.04倍)、miR-29a（2.02倍）、miR-152(2.04倍)、miR-28-3p（2.06倍）上調，miR-126（2.01倍）、miR-20b（2.04倍）下調。
　　 討論
　　 DN患者循環(huán)miRNA表達譜的研究目前尚未見報道。
　　 本次實驗發(fā)現:與正常對照組相比，DM組中，20個miRNA的表達上調;2

9、2個miRNA的表達下調。miR-572上調最明顯，miR-15b下調最明顯。與DM患者相比，DN組中，42個miRNA的表達上調，miR-193a與miR-517c上調最明顯;19個miRNA的表達下調，miR-127-3p下調最明顯。
　　 其中，隨著糖尿病、糖尿病腎病的進展，miR-1179呈逐漸上調，miR-148b、miR-150呈逐漸下調。這三個miRNA有可能參與DN的發(fā)病機制，作為DN發(fā)生發(fā)展的生物標記物。我們下

10、面的研究將在更大范圍的DN、DM患者血清中進行驗證，并進行功能性分析。
　　 通過靶基因軟件預測，miR-148b調控763個預測靶基因的表達，其中包括:BCL2、 USP33、ZFYVE26、TGFB2、HSPA4L、PODXL、FGF2、WNT1等，廣泛參與細胞凋亡、細胞外基質增生、信號轉導、足細胞損傷、wnt-β信號通路等。miR-150調控287個預測靶基因的表達，其中包括: MAPK13、CBL、GLUT4等，廣泛參與