巨桉ZFP家族基因克隆和表達(dá)分析及EgrZFP1的調(diào)控因子篩選.pdf

1、C2H2型鋅指蛋白是最常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子之一，既能夠參與調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育，也參與植物的抗逆境脅迫。植物中最早分離出的C2H2型鋅指蛋白基因是矮牽牛的ZPT2-1，之后也陸續(xù)在擬南芥、棉花、大豆、水稻等植物中分離出了該類型的鋅指蛋白基因。先前分離得到的C2H2型鋅指蛋白基因主要是草本植物的，很少有木本植物。
　　 本研究通過(guò)同源克隆的方法從低溫誘導(dǎo)的巨桉幼苗中克隆到7個(gè)C2H2型鋅指蛋白基因，分別命名為EgrZFP1-7。它們編碼的

2、蛋白都屬于C1類C2H2型鋅指蛋白，由于都具有QALGGH基序，他們也屬于Q型C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)。除了EgrZFP2以外，其它六個(gè)預(yù)測(cè)蛋白都具有EAR基序。
　　 對(duì)EgrZFP1-7基因的表達(dá)分析表明，它們?cè)诟?、莖、葉中都表達(dá)，除了EgrZFP4和EgrZFP6以外的其它5個(gè)基因在根、莖、葉中的表達(dá)量沒(méi)有明顯區(qū)別。EgrZFP4在根中表達(dá)量最高，而EgrZFP6在葉中表達(dá)量最低。不同逆境下，EgrZFP基因的表達(dá)分析表明:它們

3、在低溫下被誘導(dǎo)表達(dá)，2℃或4℃下的表達(dá)量最高。4℃不同時(shí)間處理下，EgrZFP1-6的表達(dá)量在48h時(shí)達(dá)到最高，然而EgrZFP7表現(xiàn)出了瞬時(shí)表達(dá)的特性。鹽脅迫(NaCl，200 mM)下，EgrZFP1-6表達(dá)量增加，而EgrZFP7的表達(dá)受到抑制。EgrZFP1-7基因都不受ABA（100μM）誘導(dǎo)表達(dá)，說(shuō)明它們可能不通過(guò)ABA逆境響應(yīng)途徑發(fā)揮作用。這說(shuō)明，在巨桉中EgrZFP1-7基因經(jīng)由ABA非依賴型途徑參與冷脅迫和鹽脅迫響應(yīng)。

4、
　　 通過(guò)酵母單雜交實(shí)驗(yàn)篩選得到了EgrZFP1可能的轉(zhuǎn)錄因子:NAM保守結(jié)構(gòu)域的NAC轉(zhuǎn)錄因子、β-半乳糖苷酶、ATP酶、水通道蛋白、光合作用相關(guān)蛋白和兩個(gè)無(wú)功能注釋蛋白。本研究對(duì)基因P3-1，4,5的表達(dá)分析，結(jié)果表明:表達(dá)NAC轉(zhuǎn)錄因子的P3-1基因在冷、鹽脅迫下表達(dá)量增加，而干旱和ABA處理下表達(dá)量沒(méi)有明顯變化;P3-4,5的表達(dá)量在ABA、鹽、冷脅迫下都沒(méi)有明顯變化，而在干旱下表達(dá)量增加。說(shuō)明3個(gè)基因都是經(jīng)由ABA非