小鼠肝臟中絲氨酸、蘇氨酸和賴氨酸乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)組學研究.pdf

1、蛋白質(zhì)中氨基酸的乙?；揎検且环N可逆的在真核細胞和原核細胞中都能發(fā)生的翻譯后修飾形式,參與調(diào)控多種生物學過程,如DNA-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)相互作用、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、細胞的遷移和分化等。自1968年Vidali發(fā)現(xiàn)了第一個乙?；鞍踪|(zhì)以來,科學家對氨基酸的乙酰化修飾進行了大量的研究,研究重點主要集中于賴氨酸殘基的乙?；揎?已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了300多個賴氨酸乙酰化修飾蛋白質(zhì),然而,相比生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)而言,發(fā)現(xiàn)的乙?；鞍踪|(zhì)

2、仍然只是冰山一角,賴氨酸乙酰化底物的缺乏已經(jīng)成了研究賴氨酸乙?；揎椀钠款i,限制了與賴氨酸乙酰化修飾相關的生物學功能的研究。近年來,蛋白質(zhì)組學的方法已被作為一種高通量的有效的方法用于研究蛋白質(zhì)及其翻譯后修飾形式。用HPLC分離免疫親和純化得到乙?；鞍踪|(zhì)或肽段,然后用MS/MS進行鑒定,是一個理想的研究賴氨酸乙?；揎椀姆椒ā?br>　　 除了賴氨酸殘基的乙?；揎?2006年Orth等人在研究耶爾森菌屬中的細菌毒力因子YopJ(Ye

3、rsiniaspecieseffectorprotein)時,發(fā)現(xiàn)YopJ是一種乙?；D(zhuǎn)移酶,能夠使mitogen-activatedproteinkinasekinases(MAPKK)中的絲氨酸和蘇氨酸殘基發(fā)生乙?；揎棥０l(fā)生乙?；揎椀慕z氨酸和蘇氨酸殘基位于MAPKK的活性鏈上,這兩個位點發(fā)生乙?；揎椇?同樣的位點上便不能發(fā)生磷酸化修飾,從而無法激活mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)信號通路

4、,抑制免疫應答。因此,絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椌哂兄匾纳飳W功能。目前研究絲氨酸和蘇氨酸乙酰化修飾的方法有限,由于難以得到絲氨酸、蘇氨酸乙酰化修飾的抗體,運用免疫親和純化技術預先分離和富集絲氨酸和蘇氨酸乙?；鞍谆螂亩蔚姆椒〞簳r難以實現(xiàn)。
　　 針對目前乙?；揎椦芯康默F(xiàn)狀及存在的問題,本論文從蛋白質(zhì)組學的角度對小鼠肝臟中的絲氨酸、蘇氨酸和賴氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進行了研究,共包括以下四部分內(nèi)容:
　　 第一章前言

5、部分概述了目前蛋白質(zhì)組學和翻譯后修飾蛋白質(zhì)組學的研究現(xiàn)狀,尤其對蛋白質(zhì)乙酰化修飾的研究進展做了很好的綜述,說明了本論文的選題目的及意義。
　　 第二章運用shotgun技術對小鼠肝臟中的絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進行分析,這是首次運用蛋白質(zhì)組學的方法對絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙酰化修飾進行分析。共在60個乙?；鞍踪|(zhì)中鑒定到63個乙?；稽c,其中包括絲氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)30個,共33個位點;蘇氨酸乙?；鞍踪|(zhì)22個,共2

6、2個位點。這些絲氨酸和蘇氨酸乙?；鞍踪|(zhì)均為首次發(fā)現(xiàn)可以發(fā)生絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎?。借助生物信息學工具對這些乙酰化修飾蛋白質(zhì)進行功能分析、氨基酸序列進行分析等。挑選具有重要生物學功能的乙?；鞍踪|(zhì)進行克隆表達,證明絲氨酸、蘇氨酸的乙?；揎椩谏矬w內(nèi)的存在。我們的發(fā)現(xiàn)表明與賴氨酸殘基的乙酰化修飾一樣,絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椏赡苁切∈蟾闻K中廣泛存在的翻譯后修飾形式,具有潛在的重要的生物學功能。
　　 第三章運用免疫

7、親和純化技術結(jié)合nano-HPLC/MS/MS技術,對小鼠肝臟中的賴氨酸殘基乙?；揎楇亩芜M行富集、鑒定,并對鑒定到的賴氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進行了功能分析、氨基酸序列分析。共在20個賴氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)中鑒定到21個賴氨酸乙?；揎椢稽c,其中12個蛋白質(zhì)和16個位點為首次被鑒定到可以發(fā)生乙?；揎棥Ａ硗?發(fā)現(xiàn)了三個能夠發(fā)生乙?；揎椀囊阴；D(zhuǎn)移酶,對于進一步研究賴氨酸的乙酰化修飾在多種細胞過程中的生物學功能有重要意義。