HBV人工轉(zhuǎn)錄因子的制備及其抑制HBV復(fù)制的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構(gòu)建可靶向性識別HBV增強子的鋅指蛋白(zinc fingerprotein，ZFP)人工轉(zhuǎn)錄因子（Artificial Transcription Factor，ATF）真核表達載體，檢測其在真核細胞內(nèi)的表達、對細胞增殖影響及生物學(xué)活性分析，通過靶向性識別HBV增強子來抑制HBV DNA復(fù)制與表達作用，為探索防治HBV感染的方法提供實驗依據(jù)。
　　方法:(1) ATF真核表達質(zhì)粒載體pcDNA3.1-ATF的設(shè)計與構(gòu)建。(

2、2)將pcDNA3.1-ATF轉(zhuǎn)染HepG2細胞，采用RT-PCR、免疫熒光及Western-blot檢測ATF mRNA與蛋白的表達;采用CCK-8檢測不同濃度的ATF對細胞增殖的影響;應(yīng)用熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測ATF對HBV增強子靶序列的抑制作用。(3)通過pcDNA3.1-ATF轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細胞，采用免疫熒光檢測ATF在細胞內(nèi)的表達，同時評價ATF對細胞生長的影響，分別利用熒光定量、Western-blot、RT-P

3、CR方法檢測對HBV DNA復(fù)制與表達的抑制作用。
　　結(jié)果:(1)成功構(gòu)建pcDNA3.1-ATF真核表達質(zhì)粒載體。(2) ATF在HepG2細胞中能夠正常表達且對細胞增殖生長無明顯的毒性作用;雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)分析ATF能靶向性結(jié)合HBV增強子序列，具有抑制報告基因的表達的作用。(3)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-ATF表達質(zhì)粒于HepG2.2.15細胞，成功驗證ATF具有抑制HepG2.2.15細胞內(nèi)HBV DNA復(fù)制與表達的作

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