心肌缺血期短暫肢體缺血處理對大鼠心肌保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：研究心肌缺血期短暫肢體缺血處理(remote perconditioning，RP)對大鼠心肌缺血再灌注(I/R)損傷的保護(hù)作用。
　　 方法：健康雄性Wistar大鼠經(jīng)胸骨下段切口暴露心臟，打活結(jié)的方式結(jié)扎或曠置冠狀動脈左前降支(LAD)后，經(jīng)心尖置測壓管于左心室，建立在體心肌I/R損傷模型，隨機(jī)分為7組。(1)假手術(shù)組(Sham組，n=8)：經(jīng)冠狀動脈左前降支(LAD)下穿線后，曠置；(2)缺血/再灌注組（IR組，n=

2、12)：心臟LAD實(shí)施30min缺血/l80min再灌注處理；(3)心肌缺血期短暫肢體缺血處理組(RP組，n=10)：心臟LAD實(shí)施30min缺血/l80min再灌注處理；在實(shí)施心肌缺血期間對雙下肢實(shí)施3次5min缺血/5min再灌注；(4)短暫肢體缺血預(yù)處理組(RIPC組，n=11)：心肌缺血前先對雙下肢實(shí)施3次5min缺血/5min再灌注，而后對心臟LAD實(shí)施30min缺血/l80min再灌注處理；(5)短暫肢體缺血后處理組(RI-

3、PostC組，n=11)：對心臟LAD實(shí)施30min缺血/l80min再灌注處理；再灌注開始的同時對雙下肢實(shí)施3次5min缺血/5min再灌注；(6)格列苯脲組(GL組，n=11)：心臟LAD實(shí)施30min缺血/l80min再灌注處理；在實(shí)施心肌缺血期間對雙下肢實(shí)施3次5min缺血/5min再灌注；同時腹腔注射線粒體ATP敏感性鉀通道（mKATP）抑制劑格列苯脲5mg/kg；(7)環(huán)孢霉素A組(CS組，n=10)：心臟LAD實(shí)施30mi

4、n缺血/l80min再灌注處理；心肌缺血期間經(jīng)心臟測壓管注射線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP）抑制劑環(huán)孢霉素A（CsA）10mg/kg。
　　 從再灌注性心律失常（reperfusion arrhythmia，RA）、心肌舒縮能力、心肌損傷標(biāo)志物、心梗范圍、心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)等方面評價RP對心肌IRI的保護(hù)作用。計算缺血期心律失常（ischemia arrhythmia，IA）及RA評分、左心室發(fā)展壓（LVDP）、左心室壓上

5、升/下降最大速率（±dp/dtmax）及其恢復(fù)率；ABC夾心ELISA法檢測血清肌酸激酶（CK)活性和心肌肌鈣蛋白T(c-TNT)、HE染色觀察心肌形態(tài)學(xué)改變，TTC染色法測定心肌梗死面積，免疫組化法檢測心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)，免疫印跡法（western blot）檢測心肌凋亡蛋白caspase-3的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.動物模型的評價 IR組與Sham組比較，心肌缺血期ST段顯著抬高(P

6、<0.01)，缺血期及再灌注期心律失常評分顯著增加(P<0.05)，左心室收縮峰壓（LVSPmax)，±dp/dtmax在再灌注起點(diǎn)時下降，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，c-TNT顯著升高(P<0.05)。
　　 2.RP對大鼠心肌I/R損傷所致RA、心臟舒縮功能及心梗范圍的影響 再灌注早期RP組RA評分為（1.50±0.97），與IR組（2.33±0.71）差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.049<0.05）；RP組的LVSP

7、max、±dp/dtmax均介于Sham組與IR組之間，但與IR組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。三組間CK差異無統(tǒng)計學(xué)意義，關(guān)于c-TNT，IR組與Sham組的差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.021），但RP組與IR組、sham組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。三組關(guān)于左室心肌危險區(qū)域（缺血范圍）無顯著差異，RP組心梗范圍顯著小于IR組（P<0. 01）。
　　 3.RP對大鼠心肌I/R損傷所致細(xì)胞凋亡的影響 比較IR組與RP組的Bcl-2、Bax的表達(dá)

8、結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與IR組相比，RP組Bax蛋白表達(dá)陽性心肌細(xì)胞百分比明顯降低(P<0.05)，而Bcl-2蛋白表達(dá)陽性百分比無顯著性差異(P>0.05)，Bcl-2/Bax比值明顯升高(P＜0.05)。RP組caspase-3的表達(dá)與IR組間無顯著性差異（P>0.05）。
　　 4.RP、RIPC、RI-PostC模式對大鼠心肌I/R損傷影響的比較 再灌注早期RP組RA評分與IR組之間差異顯著（P<0.05），但RIPC組、RI-Po

9、stC組與IR組、RP間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。RP組與IR組間血流動力學(xué)數(shù)據(jù)無顯著性差異。RIPC組在再灌注30min時LVDPmin高于IR組，RI-PostC組-dp/dtmax再灌注0min時顯著低于RP組（P<0.05），其余數(shù)值差異無統(tǒng)計學(xué)意義。四組間CK與c-TNT均無顯著差異。RP、RIPC、RI-PostC組心梗范圍顯著低于IR組（P<0.01），RP、RIPC、RI-PostC三組間無顯著差異。RP組、RIPC組、RI-

10、PostC組Bcl-2表達(dá)均高于IR組，RI-PostC組表達(dá)高于RP組與IR組，RIPC組表達(dá)高于IR組（P<0.05）。RP組、RIPC組、RI-PostC組關(guān)于Bax表達(dá)相當(dāng)，RP組、RIPC組顯著低于IR組（P<0.05）。IR組Bcl-2/Bax陽性單位的比值低于RP、RI-PostC、RIPC三組，與RP組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。RP組、RIPC組、RI-PostC組三組間關(guān)于Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax

11、差異無統(tǒng)計學(xué)意義。四組間caspase-3蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 5.應(yīng)用格列苯脲干預(yù)RP處理對大鼠心肌I/R損傷的影響 GL組再灌注早期RA評分低于IR組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但與RP組無顯著差異。在再灌注0min時，GL組LVSPmax及±dp/dtmax高于IR組（P<0.05）。GL組與RP組間無顯著差異。GL組c-TNT表達(dá)低于IR組及RP組（P<0.05）。GL組心梗范圍介于RP、IR組之

12、間，與RP組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與IR組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 RP組、GL組關(guān)于Bcl-2表達(dá)相當(dāng)，均高于IR組，GL組與IR組間具有顯著性差異（P<0.05）。GL組關(guān)于Bax表達(dá)介于RP、IR組之間，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。三組間Bcl-2/Bax陽性單位比值的差異缺乏統(tǒng)計學(xué)意義。GL組caspase-3的表達(dá)顯著高于IR組和RP組，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 6.心肌缺血期應(yīng)用CsA對大

13、鼠心肌I/R損傷的影響 CS組再灌注早期RA評分低于IR組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但與RP組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。CS組再灌注0、60min，LVDPmin均高于IR組；再灌注120min時，LVSPmax低于IR組；再灌注30-180min的±dp/dtmax恢復(fù)率均低于IR組。再灌注60min時-dp/dtmax，再灌注120min時LVSPmax，再灌注180min時±dp/dtmax低于RP組；再灌注30-180min

14、，-dp/dtmax恢復(fù)率及30-60min dp/dtmax恢復(fù)率均低于RP組；再灌注120min，LVDP低于RP組（P<0.05）。CS組c-TNT表達(dá)低于IR組及RP組，但無統(tǒng)計學(xué)意義。CS組心梗范圍介于RP、IR組之間，顯著小于IR組（P<0.05）。RP、CS組關(guān)于Bcl-2表達(dá)相當(dāng)，均高于IR組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。CS組Bax表達(dá)介于IR、RP組之間，但與兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。關(guān)于Bcl-2/Bax陽性單位的比值的排序為

15、：IR組　　 結(jié)論:
　　 1.經(jīng)胸骨下段切口建立大鼠心肌缺血/再灌注模型簡便易行，監(jiān)測結(jié)果穩(wěn)定可靠。
　　 2.RP能減少大鼠心肌I/R損傷，表現(xiàn)為減輕再灌注性心律失常，縮小心肌梗死面積，改善心肌形態(tài)學(xué)損傷，保護(hù)左心室收縮、舒張功能。RP可能通過減少促凋亡蛋白Bax的

16、表達(dá)來發(fā)揮對IRI誘發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用。
　　 3.肢體短暫缺血模式進(jìn)行的RIPC、RP、RI-Postc三種模式均具有心肌保護(hù)作用，表現(xiàn)為減小心肌梗死范圍，抑制心肌細(xì)胞凋亡，且保護(hù)能力相當(dāng)。
　　 4.腹腔注射格列苯脲可以減輕心肌缺血性心律失常，也部分抵消了RP的心肌保護(hù)作用。心腔注射CsA可以模擬部分RP的心肌保護(hù)作用，但其對心肌的隱匿副損傷抵消了其它的有益作用。線粒體ATP敏感性鉀通道（mKATP）和線粒體