梔子、賓川烏頭化學(xué)成分及梔子抗帕金森病藥理活性研究.pdf

1、目的：高速逆流色譜（HSCCC）法分離純化梔子藥材中環(huán)烯醚萜苷及西紅花苷化合物，賓川烏頭中主要生物堿，并對(duì)分離所得的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。建立測(cè)定含梔子中成藥中梔子苷和西紅花苷-1含量的超高效液相色譜（UPLC）法。研究梔子抗帕金森?。≒D）藥理活性及機(jī)制。
　　方法：（1）HSCCC法分離純化梔子藥材中環(huán)烯醚萜苷及西紅花苷化合物，賓川烏頭中主要生物堿，考察溶劑體系、固定相流速、主機(jī)轉(zhuǎn)速、溫度等因素對(duì)HSCCC分離效果的影響。UPL

2、C測(cè)定分離所得化合物純度，核磁共振氫譜、碳譜（1H-NMR、13C-NMR）、電噴霧離子源高分辨串級(jí)飛行時(shí)間質(zhì)譜（ESI-QTOF-MS）對(duì)化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。（2）UPLC法測(cè)定6種含梔子的中成藥（清火梔麥片、梔子金花丸、婦科分清丸、芎菊上清片、解郁安神顆粒、羚羊清肺顆粒）中梔子苷和西紅花苷-1的含量。（3）C57 BL/6雄性小鼠分為5組：正常對(duì)照組（Control），模型組（Model），梔子提取物（GJE）低、中、高劑量組（25

3、、50、100 mg/Kg）。腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶（MPTP），建立小鼠帕金森?。≒D）模型。以爬桿法、轉(zhuǎn)軸法和拉力法評(píng)價(jià) PD小鼠的行為學(xué)能力，免疫組化法（IHC）觀察酪氨酸羥化酶(TH)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，ESI-QTOF-MS法檢測(cè)紋狀體多巴胺及其代謝產(chǎn)物含量，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）測(cè)定小鼠血清中三種炎癥因子及二胺氧化酶（DAO）含量。
　　結(jié)果：（1）采用 HSCCC法以正丁醇-乙醇-水（

4、10:1:10, v/v）、乙酸乙酯-正丁醇-水（2:1.5:3, v/v）、正己烷-乙酸乙酯-正丁醇-水（1:2:1:5, v/v）、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（0.3:1:0.3:1, v/v）為溶劑體系從梔子中分離得到羥異梔子苷、6β-羥基梔子苷、梔子苷酸、梔子苷、西紅花苷-1、西紅花苷-2、西紅花苷-3、西紅花苷-4、Gardecin。純度分別為91.7％、93.4%、92.5%、98.2%、94.1%、96.3%、94.1%、

5、98.9%和97.4%。（2）采用HSCCC法以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水-氨水（1:1:1:1:0.1, v/v）為溶劑體系從賓川烏頭分離得到苯甲酰烏頭堿、N-去乙基烏頭堿、烏頭堿、去氧烏頭堿、賓烏定甲。純度分別為98.4%、97.2%、98.2%、96.8%和96.6%。（3）6種中成藥中梔子苷平均含量分別為3.58、5.32、2.17、4.57、1.23、0.38 mg/g；西紅花苷-1平均含量分別為1.52、1.06、0.35、

6、0.55、0.068、0.099 mg/g。被測(cè)定的兩種成分色譜峰均有良好的分離度，方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性良好。（4）與對(duì)照組小鼠相比，MPTP組小鼠爬桿時(shí)間變長(zhǎng)（P<0.05）、轉(zhuǎn)軸時(shí)間縮短（P<0.001）、拉力減?。≒<0.01）；酪氨酸羥化酶免疫反應(yīng)減少（P<0.01）；紋狀體多巴胺及其代謝產(chǎn)物水平降低（P<0.001）；血清中三種炎癥因子含量增多（P<0.001)；DAO含量明顯減少（P<0.001)。與MPTP組相比，G

7、JE中、高劑量給藥組小鼠爬桿時(shí)間縮短（P<0.05）、轉(zhuǎn)軸時(shí)間延長(zhǎng)（P<0.001）、拉力增大（P<0.05）、TH免疫反應(yīng)增加（P<0.01）、紋狀體中多巴胺及其代謝產(chǎn)物水平明顯提高（P<0.05）、血清中三種炎癥因子含量減少（P<0.01）、DAO含量增加（P<0.01）。
　　結(jié)論：（1）本研究建立了HSCCC法從梔子分離得到9個(gè)化合物單體，為梔子的藥理研究和質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。（2）本研究建立了HSCCC法對(duì)賓川烏頭中的主要